[发明专利]一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法

权利要求书

1.一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法，其特征是步骤如下：

（1）以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍质量的质量分数为95%~100%的乙醇浸泡24 h，4层纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇粉末备用；

（2）将步骤（1）中的猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量/体积（g/mL）比为1:15~1:30，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，得到滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，得到滤液，合并两次提取所得滤液，得到滤液和滤渣分别做以下处理：

A．滤液的处理：

①所得滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温20~25 ℃静置12 h以上，转速4800 r/min离心15 min，收集沉淀；

②在步骤①中的沉淀中依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质；脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液用相对截留分子量为3500 Da的透析袋透析，依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖；

③在步骤②中的猴头菇水提水溶性精制多糖中加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15~1:30，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；

④在步骤③中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；

⑤在步骤④中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；

⑥在步骤⑤中的上清液缓慢中加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；

⑦在步骤⑥中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；

⑧将步骤③、④、⑤、⑥和⑦离心分离所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可分别得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分；

B．滤渣的处理：

①向所得滤渣中加入0.1M~0.5MNaOH/0.01M NaBH₄溶液，重量/体积（g/mL）比为1:10~1:30，4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温20~25 ℃静置12 h以上，4800 r/min离心15 min，收集沉淀；

②在步骤①中的沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质；脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液用相对截留分子量为3500 Da的透析袋透析，依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇碱提水溶性精制多糖。

2.根据权利要求1所述的猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法，其特征是步骤（1）中用于浸泡猴头菇粉末的乙醇质量分数为95%。

3.根据权利要求1所述的猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法，其特征是所述的Sevag法脱除蛋白质所用Sevag试剂与多糖溶液的体积比为1:3。