[发明专利]一种遗传性耳聋基因检测试剂盒

说明书

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种遗传性耳聋基因检测的核酸膜条及试剂盒。所述遗传性耳聋基因检测试剂盒包括PCR反应液，所述PCR反应液包括PCR反应液A、PCR反应液B、PCR反应液C、PCR反应液D和PCR反应液E；所述PCR反应液包括对应的引物和探针。本发明试剂盒利用文献报道的各种突变位点的序列设计特异扩增的LATE‑PCR专用引物，采用锁核酸修饰的ZNA^TM探针，使最少管的反应液检测最多的位点。本发明试剂盒中的PCR反应液A、B、C、D、E可使用同一扩增程序在同一台荧光PCR仪上进行测试，满足临床快速、方便检测耳聋的需求。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种遗传性耳聋基因检测试剂盒。

背景技术

目前市场上已有的耳聋基因检测产品主要有博奥的九项遗传性耳聋相关基因检测试剂盒(微阵列芯片法)和十五项遗传性耳聋相关基因检测试剂盒(微阵列芯片法)；凯普的耳聋易感基因检测试剂盒(PCR+导流杂交法)；中生北控的四项耳聋基因检测试剂盒(ARMS-PCR法)；济南英盛的先天性耳聋基因检测试剂盒(荧光PCR法)、药物性耳聋基因检测试剂盒(荧光PCR法)、耳聋基因GJB2 235delC检测试剂盒(荧光PCR法)和PDS基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)；智海生物工程有限公司的药物性耳聋基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)。尽管目前检测耳聋的产品有很多，但是尚未有直接、快速、同时检测多个突变位点的产品。

厦门大学相关专利《一种耳聋易感基因突变检测试剂盒及其制备方法与应用》(专利公开号104263848A)是所有专利中检测位点最多的，但也仅检测23种非综合征遗传性耳聋基因突变位点，无锡中德美联生物技术有限公司相关专利《一种遗传性耳聋基因检测试剂盒》(专利公开号103352080A)仅检测17种非综合征遗传性耳聋易感基因突变，陈瑛《中国人群耳聋基因筛查试剂盒及其应用》(专利公开号103911452A)检测17种非综合征遗传性耳聋易感基因突变，北京科聆金仪生物技术有限公司《一种高特异性聋病易感基因检测试剂盒及其应用》(专利公开号102534031A)检测12种聋病易感基因突变，这些检测试剂盒检测能力有限，或者通量低、或者耗时费力，更重要的是难以同时对不同基因的多个突变位点进行高通量检测。本公司相关专利为《一种遗传性耳聋基因检测的核酸膜条及试剂盒》(专利开号104498609A)和现在本公司申请发明专利不属于同一个技术平台。

目前我国临床应用的检测非综合征遗传性耳聋基因的试剂盒主要是基于液相芯片杂交法的原理开发的，实现在多管PCR体系中对多个基因中为数不多的突变位点进行检测，如博奥生物技术有限公司、潮州凯普生物化学有限公司的十五项遗传性耳聋相关基因检测试剂盒和耳聋易感基因检测试剂盒能分别实现对15种和9种耳聋易感基因突变位点的检测，但是这些方法或者所需专用仪器价格高、或者通量低、或者操作复杂耗时费力。

除了上述的基于液相芯片杂交法的试剂盒，临床上还有一种是基于荧光PCR技术的原理开发，如中生北控和济南英盛生物技术有限公司开发的试剂盒仅能实现对耳聋易感基因的少数几个位点进行检测，特别是济南英盛的每个试剂盒只能对一个基因的少数几个位点进行检测、检测位点少、通量低、如需同时对一个样本的几个耳聋易感基因进行检测，需要同时使用三个试剂盒、成本高。

目前国内还没有针对中国人群多个耳聋易感基因的多个突变位点进行检测的试剂盒。因此，有必要建立一种高通量、高效能、低成本的耳聋基因突变筛查方法，已实现临床快速检测或者规模化人群筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可一次同时检测与遗传性耳聋相关的四个热点基因中的30个突变位点的遗传性耳聋基因检测试剂盒。

本发明提供一种遗传性耳聋基因检测试剂盒，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括PCR反应液A、PCR反应液B、PCR反应液C、PCR反应液D和PCR反应液E；

所述PCR反应液A包括如下引物和探针：