[发明专利]一种利用干细胞构建的人源化乙型肝炎鼠模型及应用

说明书

本发明公开了一种利用干细胞构建的人源化乙型肝炎鼠模型及应用，包括获取人干细胞，将人干细胞植入肝损伤的鼠，致使鼠体内存在移植的人干细胞1×10^4‑8等步骤，可在进行抗病毒药物耐药性研究、进行慢性乙型肝炎发病机制研究等方向的应用。本发明所公开的人源化慢性乙型肝炎鼠模型除了用于研究乙肝病毒感染机制外，还可用于治疗的研究。针对目前乙肝药物的开发，大多基于肝细胞水平，缺乏有效的动物模型进行药物的全面评估。该模型简单易得，很好的模拟了人体感染乙肝病毒的应答反应，对于慢性乙型肝炎药物的研发具有重大意义。

技术领域

本发明属于临床医学、实验医学、再生医学和病毒学领域，具体地说，是一种基于干细胞技术构建的人源化慢性乙型肝炎模型。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)流行范围广，据统计，我国有1亿左右的乙肝病毒感染者。由于慢性乙型肝炎无法彻底治愈，给社会、家庭和患者带来了沉重负担。同时，因为乙型肝炎病毒只能在高级灵长类动物中致病，动物实验模型常需使用猿猴类动物，猿猴类实验成本高，操作复杂，实验周期长。而目前较为常用的鸭乙型肝炎模型是基于禽类载体，与人类的种属差异大，具有较大的局限性。由于慢性乙型肝炎难以治愈，根据2015年世界卫生组织报告，约有30％的乙肝患者会进入肝硬化和肝癌，对患者生命健康造成重大威胁。而目前常用的肝硬化动物模型，均为手术(如胆总管结扎)和化学药物(四氯化碳、二甲基亚硝胺等)，这一类肝硬化模型为非乙肝病毒所致，故在疾病的机制与转归上与乙肝所致的肝硬化有很大的差异，不适合用于研究乙肝肝纤维化、肝硬化发生发展的机制与治疗。在我国肝癌患者中，由乙肝引起的原发性肝癌占肝癌的绝大多数，原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，病死率高，早期诊断困难。其它利用小动物构建的肝癌模型多基于化学药物，这类模型与基于HBV感染引起的肝癌模型有很大区别，尤其是在发病机制上，存在明显的差异。

因此，建立能感染乙型肝炎病毒并致病的小型哺乳动物模型有很大的科学意义和应用价值。但由于乙肝病毒无法感染小型哺乳动物，因此小型哺乳动物研究模型建立困难，严重阻碍了肝脏疾病发生进展机制、治疗和转归的研究，并很大程度上限制了治疗方案的优化。建立人源化慢性乙型肝炎鼠模型将为研究病毒性肝炎机制及其治疗与疾病转归提供良好的研究载体。骨髓间充质干细胞具有潜在分化能力，可以分化成成熟肝细胞，我们之前的研究发现人骨髓间充质肝细胞(hBMSC)能嵌合在肝损伤的鼠肝内，嵌合率高达50-95％，为建立新型人源化鼠模型奠定了基础，此鼠模型对阐明慢性乙型肝炎病毒生物学特性、发病机制、研发和筛选治疗新药物等提供保障，为研究肝炎及其治疗与疾病转归提供良好的研究载体。

发明内容

本发明正是针对现有原发性肝癌模型的缺陷，提供了一种人源化乙型肝炎鼠模型，本发明是通过以下技术方案来实现的：

本发明公开了一种利用干细胞构建的人源化慢性乙型肝炎鼠模型，所述的鼠模型由以下步骤获得：

1)、获取人干细胞；

2)、将人干细胞植入肝损伤的鼠，致使鼠体内存在移植的人干细胞1*10^{4^8}；

3)、人肝细胞嵌合：鼠肝脏内，移植的人干细胞分化形成人肝细胞；人源化的免疫系统：鼠体内，移植的人干细胞分化形成人免疫系统；

4)、HBV感染人源化鼠；

5)、HBV感染的确认、肝脏疾病的确认。

作为进一步地改进，本发明所述的人干细胞的来源是健康人分离培养的干细胞或商品化的细胞系。

作为进一步地改进，本发明所述的肝损伤的鼠包括化学药物所致的肝脏化学损伤和外科手术所致的肝脏物理损伤，鼠是正常小鼠或免疫缺陷小鼠或正常大鼠或免疫缺陷大鼠。

作为进一步地改进，本发明所述的步骤3)中，移植的人干细胞分化形成人肝细胞，干细胞可表达人肝细胞标志物是HSA，HLA，ALB或NTCP等。