[发明专利]一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法，包括以下步骤：步骤1：样品溶液制备：将乌榄叶干燥粉碎后，对粉粹后的乌榄叶进行超声提取后定容过滤得到样品溶液；步骤2：制备对照品溶液；所述的对照品溶液中含有已知量的绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素；步骤3：色谱分析：将样品溶液、对照品溶液经过高效液相色谱法分析后即可计算得到绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素在乌榄叶中的含量。本发明的目的在于提供一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法，可更为直观快速有效地测定乌榄叶的主要活性成分，检测精度和准确性高，重复性好，为乌榄叶的进一步开发提供有力的科学依据。

技术领域

本发明涉及乌榄叶的测定领域，具体涉及一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法。

背景技术

乌榄(Canarium pimela Leenh.)又名黑橄榄，木威子，是木本油料兼果用常绿乔木树种，在植物分类上属于橄榄科橄榄属，原产于我国华南地区，广泛分布于越南等东南亚国家，其根、叶、种仁均可入药，民间常将其用于治疗风湿腰腿痛、手足麻木、胃痛、汤火伤。

乌榄叶简单易得，经济效益高。本课题组前期研究中，通过大鼠离体血管环灌流、颈动脉插管和离体心脏灌流等方法，发现乌榄叶提取液具有快速短效的降压作用，且其降压效果与持续时间随着药物剂量的增大而提高且延长；同时其还具有明显的减慢心率、稳定和增加冠脉流量等心血管方面的作用。

研究结果提示乌榄叶提取液中存在具有作用于心血管的活性物质，而在成分分析方面，已有的对乌榄叶的研究报道主要在挥发油上，而其他化学成分研究暂未见相关报道，物质基础存在大片空白。

此外，国内外大量的研究表明绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素均具有抗氧化、抗癌、保护心血管系统等生物活性，具有潜在的良好应用前景。在含量测定方面，目前尚未公开记载同时测定绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素这六种成分含量的高效液相色谱法。

发明内容

本发明公开了一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法，具体来说，该六种成分为绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素，本发明的方法可更为直观快速有效地测定乌榄叶的主要活性成分，检测精度和准确性高，重复性好，为乌榄叶的进一步开发提供有力的科学依据。

本发明提供的一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法，包括以下步骤：

步骤1：样品溶液制备：将乌榄叶干燥粉碎后，对粉粹后的乌榄叶进行超声提取后定容过滤得到样品溶液；

步骤2：制备对照品溶液；所述的对照品溶液中含有已知量的绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素；

步骤3：色谱分析：将样品溶液、对照品溶液经过高效液相色谱法分析后即可计算得到绿原酸、牡荆素、异牡荆素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素在乌榄叶中的含量；

其中，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为C-18色谱柱，250*4.6mm，5μm；流速为1mL/min；

检测波长为360nm；柱温为30℃；进样体积为20μL；流动相为甲醇-0.4％磷酸，梯度洗脱；采用外标法定量，色谱图记录与处理由工作站完成，理论塔板数按绿原酸峰计算，不低于8000。

需要说明的是，上述的步骤1具体为：

将乌榄叶干燥粉碎，过二号筛；

精密称定乌榄叶粉末0.5g于具塞锥形瓶中，精密加入体积百分数为50％的甲醇水溶液50mL，密塞浸泡30min后超声30min，静置冷却；

加入体积百分数为50％的甲醇水溶液补足失重，摇匀，过滤；取续滤液过0.22μm微孔滤膜，即得样品溶液。