[发明专利]一种测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法。

背景技术

甘蔗梢腐病是甘蔗生产上的一种重要真菌性病害，主要侵染甘蔗嫩梢，导致甘蔗叶片腐烂，甚至植株死亡，对甘蔗品种造成产量和含糖量的显著下降。甘蔗梢腐病在我国普遍发生，几乎所有的甘蔗品种均可感染梢腐病，感病品种梢腐病发病率可达到38％以上，导致甘蔗减产5％-20％，甘蔗糖分降低达3％。甘蔗梢腐病(Pokkah Boeng)是由多种镰刀菌引起的一种甘蔗叶部病害，病原菌为藤仓赤霉病菌复合种(Gibberella fujikuroi complex)，无性态至少包括Fuarium sacchri、F.proliferatum、F.verticillioides、F.subglutinan和F.andiyazi等5种镰刀菌。应用抗病优良品种是有效控制甘蔗梢腐病的科学途径。甘蔗梢腐病的抗病育种首先需要大量筛选病原菌株，并获得强致病力的病原菌株，从而利用强致病力菌株对甘蔗品种及种质资源进行筛选和评价。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简易、精准、有效、重复性好的离体测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法。使得甘蔗叶片样本的采集和测定不受栽培季节以及苗龄的影响。

为实现上述目的，本发明提供了一种测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法，包括以下步骤：

(1)将甘蔗梢腐病菌接种在PDA培养基平板上，25-28℃培养3-5天；

(2)选择甘蔗梢腐病感病品种，采集新鲜甘蔗叶片，清洗叶片，将叶片剪成片段，在叶片中间叶脉两侧刺伤，取甘蔗梢腐病菌的菌块接种在刺伤部位，以长有菌丝的一面贴在伤口处；

(3)将接菌的甘蔗叶片置于培养皿中，喷洒无菌水，于室温条件下放置3-5天；

(4)观察和测量病斑的长度，沿着叶脉方向测量黄色晕圈的长度，以病斑的长度区分病原菌致病力的强弱。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(2)中采集新鲜甘蔗叶片为，从心叶往下数第2至第4张完全展开叶片。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(2)中叶片剪成的片段长度为10-14cm。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(2)中取菌块为，用灭菌的移液器枪头挖取菌块，菌块直径为5-6mm。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(3)中喷洒无菌水的量为3-5ml。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(3)中培养皿选用直径为15cm。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法，采用离体接种测定甘蔗梢腐病菌的致病力，甘蔗叶片样本的采集不受甘蔗苗龄、种植时期的影响，测定条件易控制。甘蔗离体叶片在保温保湿条件下可在一定时间内不干枯，保证了病原菌的侵染。本发明方法能够简易、精准、有效且重复性好的测定甘蔗梢腐病病菌致病力。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

实施例

一种测定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法，包括以下步骤：

1、接种体的制备

分别培养甘蔗梢腐病病原镰刀菌。具体为：分别将甘蔗梢腐病病原菌接种在PDA培养基平板上活化3天，挑取边缘菌丝接种新的PDA培养基平板上，25-28℃培养3-5天，用灭菌的1mL移液器枪头(宽口的一端)挖取菌丝块(直径约5-6mm)，待用。

2、接种材料的处理

选择生产上表现为甘蔗梢腐病感病品种GT37，抗病品种ROC22和中感材料GT08-120，采集新鲜甘蔗叶片(从心叶往下数第2至第4张完全展开叶片)，用清水冲洗干净表面的尘土，晾干，剪成约12cm的片段。

3、接种

用大头针在叶片中间叶脉两侧刺伤，按照约3×3mm的方式共刺4针。取甘蔗梢腐病菌菌块，接种在刺伤部位，以长有菌丝的一面贴在伤口处，菌碟完全盖住刺伤口。每个菌株分别在10张叶片叶脉的一侧接种，另一侧以接纯PDA培养基为对照。将接菌的甘蔗叶片至于直径15cm的玻璃培养皿中，喷洒适量的无菌水(约3-5mL)。于室温条件(25-28℃)下放置3-5天。

4、病情调查

观察和测量病斑的长度。沿着叶脉方向测量黄色晕圈的长度，去除一个最高值和一个最低值，以剩余数值的平均值代表该病原菌致病力的强弱。