[发明专利]净化伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及复合亲和柱

权利要求书

1.伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体免疫吸附剂，其特征在于：所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的伏马毒素B1单克隆抗体、黄曲霉毒素单克隆抗体、赭曲霉毒素A单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的伏马毒素B₁抗体为由保藏编号为CCTCC NO.C201636的杂交瘤细胞株Fm7A11分泌产生的单克隆抗体，所述的杂交瘤细胞株Fm7A11已于2016年3月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.C201636。

2.根据权利要求1所述的伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体免疫吸附剂，其特征在于：所述固相载体为琼脂糖凝胶。

3.装载有权利要求1所述的伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体免疫吸附剂的伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱。

4.权利要求3所述的伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

a) 基质制备

将CNBr活化的琼脂糖凝胶基质粉末在pH2-3的条件下用HCl洗涤除杂；

b) 配体偶联

使用偶联缓冲液溶解待偶联的伏马毒素B1单克隆抗体、黄曲霉毒素B1单克隆抗体、赭曲霉毒素A单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体，获得抗体溶液，迅速将步骤a) 活化的琼脂糖凝胶基质转移到上述抗体溶液中，室温条件20-25℃下充分混匀上述混和物2-4h；

c) 配体封闭

封闭所有残留的活性基团；

d) 除去偶联后未偶联上的多余的配体；

e) 装柱。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤a）中洗涤用HCl浓度为1mmol/L，洗涤时间为15min。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤b）中的偶联缓冲液为0.2mol/LNa₂HCO₃，pH8.3，每个抗体溶液浓度为10-15 mg/mL。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤c）的配体封闭过程为：转移经步骤b) 处理的琼脂糖凝胶基质至0.1mol/LTris-HCl缓冲液中，室温条件下静置2-4h。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤d）为：依次用pH值为4和pH值为8的缓冲液对经步骤c)处理后的琼脂糖凝胶基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；

pH值为4和pH值为8的缓冲液分别选0.1mol/L 醋酸/ 醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris-HCl缓冲液。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤e）为用5倍所述琼脂糖凝胶体积的0.01％ NaN3-PBS洗涤，并使用0.01％ NaN3-PBS保存，然后装柱。

10.基于权利要求3所述的复合亲和柱检测伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量的方法，其特征在于：将待测样品通过权利要求3所述的伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱，免疫吸附剂会特异性的吸附伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，其他的杂质则流出伏马毒素B₁、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱，然后用色谱级甲醇洗脱亲和柱，收集洗脱液即净化浓缩后的样品供高效液相色谱-质谱联用仪检测，得各毒素含量。