[发明专利]一种融合蛋白和基于该融合蛋白的ELISA方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，具体涉及一种融合蛋白和基于该融合蛋白的ELISA方法。

背景技术

ELISA（Enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）作为一种成熟的抗原抗体检测技术，已经在市场上得到广泛的应用。然而，由于检测过程需要使用酶标仪或分光光度计，受制于检测仪器，应用现场环境较严格，也使得检测的时效性受到一定影响。因此，发明一种便捷、易携带、对现场环境要求低同时也兼具高灵敏度的ELISA检测方法可极大地拓展检测适用的范围和提高操作的便捷程度。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种融合蛋白和基于该融合蛋白的ELISA方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：

MLLQAFLFLLAGFAAKISASMTNETSDRPLVHFTPNKGWMNDPNGLWYDEKDAKWHLYFQYNPNDTVWGTPLFWGHATSDDLTNWEDQPIAIAPKRNDSGAFSGSMVVDYNNTSGFFNDTIDPRQRCVAIWTYNTPESEEQYISYSLDGGYTFTEYQKNPVLAANSTQFRDPKVFWYEPSQKWIMTAAKSQDYKIEIYSSDDLKSWKLESAFANEGFLGYQYECPGLIEVPTEQDPSKSYWVMFISINPGAPAGGSFNQYFVGSFNGTHFEAFDNQSRVVDFGKDYYALQTFFNTDPTYGSALGIAWASNWEYSAFVPTNPWRSSMSLVRKFSLNTEYQANPETELINLKAEPILNISNAGPWSRFATNTTLTKANSYNVDLSNSTGTLEFELVYAVNTTQTISKSVFADLSLWFKGLEDPEEYLRMGFEVSASSFFLDRGNSKVKFVKENPYFTNRMSVNNQPFKSENDLSYYKVYGLLDQNILELYFNDGDVVSTNTYFMTTGNALGSVNMTTGVDNLFYIDKFQVREVKAAAAAAMDPSKDSKAQVSAAEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAASIDAAKKAGVNNGNPLDAVQQ。

所述融合蛋白可用于制备ELISA检测试剂及试剂盒。

基于上述融合蛋白的ELISA方法包括如下步骤：

（1）将检测样品与相应抗体结合：将具有专一性的抗体固定在塑胶孔盘上，当固定稳固后洗去多余的抗体；然后加入待测的检测样品，使检测样品与抗体充分结合，待结合牢固后洗去多余的检测样品；

（2）加入生物素标记的抗体：加入生物素标记的抗体后形成抗体-待测样品-生物素标记抗体的夹心复合物；待生物素标记抗体与待测样品结合牢固后，洗去多余的生物素标记抗体；

（3）将所述的融合蛋白加入到塑胶孔盘中，使该融合蛋白与夹心复合物结合后得到最终复合物，待结合牢固后洗去多余的融合蛋白；所述的融合蛋白为链霉亲和素-蔗糖酶融合蛋白，链霉亲和素具有与某些蛋白质形成共价键的能力，根据链霉亲和素的这一特性，可以使链霉亲和素与蔗糖酶融合形成链霉亲和素-蔗糖酶融合蛋白；

（4）待测样品的检测：向最终复合物中加入浓度为50 mM的蔗糖溶液，其中蔗糖溶液与最终复合物的体积比为1:1，并测定葡萄糖的量，葡萄糖的量即为检测样品。由于蔗糖在蔗糖酶的作用下可以分解成葡萄糖，所以可以根据得到的葡萄糖的量来确定构建的最终复合物的量，而最终复合物与检测样本为1：1的关系，即可以通过葡萄糖的量来确定检测样本的含量。由于检验葡萄糖的方法十分简便，可以通过血糖仪等设备及时检测，所以通过该方法可以迅速检测出检测样本的相关指标。

下面对本发明作进一步说明：

（1）生物素标记的抗体化。

应用生物素标记抗体是70年代后期发展的一类新型生物反应放大技术。生物素是动、植物中广泛分布的一种羧化酶的辅酶。它的咪哇环基是和亲和素色氨酸残基结合的部分，其戊酸侧链上的羧基是与抗体或酶结合的位点。生物素经羟基丁二酰亚胺活化为生物素-N-羟基丁二酰亚酯，其酯基可与不同的基团结合而不影响后者活性。结合于抗体分子上的生物素可与多个亲和素结合，从而产生多级放大效应。