[发明专利]一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法

权利要求书

1.一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一：胱氨酸标准溶液的配制，用电子天平称取1.2015g的L-胱氨酸，用适量的氢氧化钠溶解，调节pH，并用蒸馏水定容至50mL的容量瓶中，配制成0.1mol/L的溶液，之后可以根据需要将储备液进行稀释，临用配制作为操作液；

步骤二：称取0.6057g的三羟甲基氨基甲烷(Tris)，用蒸馏水溶解并定容至50mL的容量瓶中，配制成0.1mol/L的溶液；将50mL0.1mol/L Tris溶液与7.0mL0.1mol/L的盐酸混匀并稀释至100mL，配制成0.05mol/L的Tris-HCl缓冲溶液；

步骤三：荧光光谱的实验，准确移取1mL 0.1mol/L胱氨酸标准溶液至10mL比色管中，加Tris-HCl缓冲溶液，再加蒸馏水定容至10mL，摇匀，室温静置15min；在水浴加热后，于CaryEclipse和F-7000荧光分光光度计上测量；设置各项荧光光谱测量参数如下：激发波长：410nm；狭缝比5.0nm/5.0nm；发射光谱波长范围：415～700nm；扫描速度：中速；将反应后胱氨酸溶液在FLS920荧光光谱仪上测定其荧光量子产率，在FS5荧光光谱仪上测定荧光寿命；

步骤四：胱氨酸片样品的荧光光谱测定；准确移取市售胱氨酸片10片，用研钵研细，用电子天平准确称取0.1g，加到10mL洁净干燥的比色管中，加少量碱溶后加水定容超声溶解后，过滤；取1mL于10mL洁净干燥的比色管中，加的Tris-HCl缓冲溶液，再加蒸馏水定容，摇匀，室温静置15min；水浴加热后，制成溶液；于荧光分光光度计上，设置狭缝5.0nm/5.0nm，最佳激发波长Ex＝410nm，在415～700nm扫描范围内进行荧光光谱分析；同时用二次水进行空白实验。

2.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH＝8.9。

3.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲溶液用量为5mL。

4.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，所述水浴加热时间为12小时。

5.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，所述水浴加热的加热温度为90℃。

6.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法，其特征在于，荧光强度在一定范围内随着胱氨酸浓度的增加而增强，线性范围为1×10^-4mol/L-1×10^-3mol/L，相关系数r＝0.9927， 拟合的线性方程为：Y＝-19.02+4.524×10⁴C(mol/L)；检 出限QL＝3S_D/K＝4.0×10^-5mol/L，K为工作曲线的斜率。