[发明专利]一种西红柿中烟碱的手性分析合相色谱串联质谱法

说明书

本发明公开了一种西红柿中烟碱的手性分析合相色谱串联质谱法。其特征在于：将西红柿样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用两根手性柱串联‑合相色谱串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测西红柿中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例。本方法提供的检测方法，样品萃取净化方法简单高效，可降低样品液对色谱柱的污染，合相色谱串联质谱法检测方法灵敏度高，特异性好，可排除假阳性，分析时间短，能够满足大批量西红柿样品中烟碱的手性分析。

技术领域

本发明涉及西红柿化学成分测定方法，具体涉及一种西红柿中烟碱的手性分析合相色谱串联质谱法。

背景技术

烟碱，也叫尼古丁，是一种存在于茄科植物中的生物碱，也是烟草的重要成分。烟碱分子含有一个手性中心，即四氢吡咯环上的2位碳原子，所以烟碱有两个对映体：S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱。烟碱的两个对映体具有完全不同含量、代谢机理和生理特性。因此需进行西红柿中烟碱的手性分析。

目前关于烟碱的手性分析，主要是采用气相色谱法进行研究，例如申请号为201610663534.1的专利《一种卷烟烟丝中烟碱的手性分析方法》，该方法前处理步骤复杂，并且检测时间达到140min，不能满足大量样品的检测，目前尚未有关于西红柿中烟碱的手性分析的方法。因此有必要开发一种灵敏度高、精密度好、适合大批量准确定量西红柿中S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的方法。手性柱-合相色谱串联质谱在异构体分离方面有着明显的优势，因此通过大量实验建立了西红柿中烟碱手性的手性柱-合相色谱串联质谱分析方法，该方法更适合用于大量样品中烟碱的手性分析。

发明内容

本发明的目的正是以烟碱为研究对象，对西红柿样品进行了前处理方法研究，建立了串联手性柱-合相色谱串联质谱法检测西红柿中烟碱旋光异构体的分析方法，实现了对西红柿中烟碱旋光对映体S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的准确测定。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：将西红柿样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用串联手性柱-合相色谱串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测西红柿中S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的比例。具体步骤如下：

1. 标准溶液的配制：称取约100.0 mg的S-(-)-烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的S-(-)-烟碱标准储备液；称取约50.0mg的R-(+)-烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为1.0mg/mL的R-(+)-烟碱标准储备液；利用S-(-)-烟碱标准储备液和R-(+)-烟碱标准储备液稀释配制S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱浓度分别为100 μg/mL和80 μg/mL的混合标准溶液。

2.西红柿样品的混匀：将西红柿样品置于40 ℃烘箱中，1小时后将西红柿取出，使用冷冻干燥机粉碎后过0.45毫米孔径标准筛。

3. 西红柿样品的萃取：称取2 g已粉碎的样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL5% 的氢氧化钠溶液，涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品。取10 mL甲基叔丁基醚和甲醇（90:10，V/V）溶液到离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min，过滤上清液并氮吹浓缩至2 mL。

4. 萃取液的净化：取1.5 mL浓缩液于2 mL净化离心管中（内含150 mg无水硫酸镁，25 mg PSA吸附剂，7.5 mg GCB吸附剂，统称基质分散固相萃取材料），于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min。取上清液氮吹浓缩至0.3 mL后过0.22 μm有机相滤膜后进合相色谱串联质谱分析。