[发明专利]抗埃博拉病毒单克隆抗体、其制备方法及用途

权利要求书

1.抗埃博拉病毒单克隆抗体，其轻链和重链的氨基酸序列选自如下所示的1）－2）中的一组：

1）轻链氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示；

2）轻链氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO: 11所示；

其制备方法包括：

（1）将敲除gft基因的CHO-K1细胞在含10%小牛血清的种子培养基中进行贴壁培养，依次按照10%、5％、2.5％、1.25％、0%的血清含量逐级去除血清，转置摇瓶培养，继续传代数次后，宿主细胞完全悬浮，成倍增长稳定，最终获得能够在种子培养基中生长的宿主细胞；

（2）将编码1）或2）的抗埃博拉病毒单克隆抗体的序列克隆入表达载体中，得到重组表达载体；

（3）将重组表达载体转入步骤（1）获得的宿主细胞，得到重组细胞；

（4）将步骤（3）获得的重组细胞在含75μM MSX的种子培养基中进行培养，获得能够表达抗体的细胞株；

（5）逐步放大培养步骤（4）获得的细胞株，转移至发酵培养基，在发酵培养基中的培养周期为12-14天，培养第3、6、9天加入10％体积的流加培养基；

（6）将步骤（5）获得的培养上清进行纯化得到抗埃博拉病毒单克隆抗体，其岩藻糖的含量占总含糖量的1.8%以下；

所述发酵培养基为生产培养基与种子培养基按1:1体积比混合的培养基，其中所述种子培养基如表1-1所示：

；

所述生产培养基如表1-2所示：

；

所述流加培养基如表1-3所示：

。

2.核酸分子，其含有编码权利要求1的抗埃博拉病毒单克隆抗体的序列。

3.权利要求2的核酸分子，其含有选自如下i）－ii）中的一组所示的核苷酸序列：

i）SEQ ID NO: 1所示的序列，和SEQ ID NO: 2所示的序列；

ii）SEQ ID NO: 7所示的序列，和SEQ ID NO: 8所示的序列。

4.重组载体，其含有权利要求2-3任一项的核酸分子。

5.重组细胞，其含有权利要求4的重组载体，所述细胞为gft基因敲除的CHO-K1细胞。

6.组合物，其含有权利要求1的抗埃博拉病毒单克隆抗体、权利要求2-3任一项的核酸分子、权利要求4的重组载体或者权利要求5的重组细胞，以及任选的药学上可接受的载体或赋形剂。

7.一种抗埃博拉病毒单克隆抗体的制备方法，其包括以下步骤：

（1）将敲除gft基因的CHO-K1细胞在含10%小牛血清的种子培养基中进行贴壁培养，依次按照10%、5％、2.5％、1.25％、0%的血清含量逐级去除血清，转置摇瓶培养，继续传代数次后，宿主细胞完全悬浮，成倍增长稳定，最终获得能够在种子培养基中生长的宿主细胞；

（2）将编码权利要求1所述的抗埃博拉病毒单克隆抗体的序列克隆入表达载体中，得到重组表达载体；

（3）将重组表达载体转入步骤（1）获得的宿主细胞，得到重组细胞；

（4）将步骤（3）获得的重组细胞在含75μM MSX的种子培养基中进行培养，获得能够表达抗体的细胞株；

（5）逐步放大培养步骤（4）获得的细胞株，转移至发酵培养基，在发酵培养基中的培养周期为12-14天，培养第3、6、9天加入10％体积的流加培养基；

（6）将步骤（5）获得的培养上清进行纯化得到抗埃博拉病毒单克隆抗体，其岩藻糖的含量占总含糖量的1.8%以下；

所述发酵培养基为生产培养基与种子培养基按1:1体积比混合的培养基，其中所述种子培养基如表1-1所示：

；

所述生产培养基如表1-2所示：

；

所述流加培养基如表1-3所示：

。