[发明专利]一种PF1022A分离纯化的方法

说明书

本发明提供了一种PF1022A分离纯化的方法。该方法包括如下步骤：从含PF1022A的发酵液中收集菌渣；将丙酮与菌渣混合，萃取、过滤，得提取液1，浓缩，得提取液2；将提取液2上样大孔树脂，预洗脱后，洗脱，收集活性部位，得含PF1022A的洗脱液，将其浓缩至除去有机溶剂，得含PF1022A的浓缩液；将含PF1022A的浓缩液用乙酸乙酯萃取后，得有机相和水相，将所得有机相浓缩、结晶即可；大孔树脂为H‑60反相吸附树脂和/或HB‑60反相吸附树脂。该方法操作简便、成本低、所用溶剂毒性较小、大孔树脂可反复使用、产物检测方法简单，适于工业化生产，所得PF1022A的收率可达70％，纯度可达91％以上。

技术领域

本发明涉及一种PF1022A分离纯化的方法。

背景技术

PF1022A(结构式见式1)是一种不产孢子的半知菌无孢霉菌(Rosellinia sp.)发酵产生的环缩肽类化合物，对动物低毒、驱虫普广、效果好，是合成新型兽药emodepside(结构式见式2)的关键中间体。目前PF1022A主要通过发酵半知菌无孢霉菌获得。

PF1022A作为生产emodepside的关键中间体，其分离纯化报道较少。PF1022A呈弱极性，可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂，难溶于水。文献“A new anthelminticcyclodepsipeptide，PF1022”(THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS，1992，45(5)：692-697)报道了一种PF1022A分离纯化的方法，该方法首先利用乙酸乙酯提取出菌体中的产物，萃取液进行浓缩后用氯仿溶解，然后用硅胶柱进行分离层析，以氯仿和甲醇的混合物作为洗脱剂进行洗脱。但是氯仿具有致癌性，硅胶柱不可重复使用，产物的检测方法繁琐，不利于产业化生产。因此有必要改进PF1022A的分离纯化方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中PF1022A提取时溶剂毒性大、硅胶柱不可重复利用以及产物的检测方法繁琐的缺陷，而提供一种PF1022A分离纯化的方法，该方法操作简便、成本低、所用溶剂的毒性较小、大孔树脂可反复使用、产物检测方法简单，收率可达70％，适于工业化生产，所得PF1022A的纯度可达91％以上。

本发明提供了一种PF1022A分离纯化的方法，其包括如下步骤：

(1)从含PF1022A的发酵液中收集菌渣；

(2)将丙酮与所述菌渣混合，进行萃取，过滤，得提取液1，然后浓缩，得提取液2；

(3)将所得提取液2上样大孔树脂，预洗脱除杂后，进行洗脱，收集活性部位，得含PF1022A的洗脱液，并将其浓缩至除去有机溶剂，得含PF1022A的浓缩液；

(4)将含PF1022A的浓缩液用乙酸乙酯萃取后，得有机相和水相，将所得有机相浓缩、结晶即可；

所述大孔树脂为H-60反相吸附树脂和/或HB-60反相吸附树脂。

本发明中，含PF1022A的发酵液为本领域常规，一般由半知菌无孢霉菌经过本领域常规方法发酵获得，常规能够生产PF1022A的菌株均可使用，如半知菌无孢霉菌NBRC-33096(购于日本技术评价研究所生物资源中心)，本领域常规的含PF1022A的发酵液均适用于本发明的方法。