[发明专利]mTOR抑制剂在制备治疗脉络黑色素瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物制备领域，尤其涉及一种mTOR抑制剂在制备治疗脉络黑色素瘤药物中的应用。

背景技术

葡萄膜黑色素瘤(Uveal melanoma,UM)是成人发生率最高的眼内恶性肿瘤，起源于葡萄膜层，恶性程度高，极易发生早期转移，预后差，死亡率高，严重威胁患者视力与生命。因此，研究眼部黑色素瘤发生机制，对探寻眼部黑色素瘤早期诊断和治疗新靶点，提高治疗有效性，降低眼球摘除率以及转移率，提高患者视觉预后以及生存寿命，具有十分重要的临床指导和科学意义。

因此，一种治疗眼部黑色素瘤的药物是十分具有实用价值的。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种mTOR抑制剂在制备治疗脉络黑色素瘤药物中的应用，其为临床治疗提供新的靶点和治疗药物，提高治疗有效性，降低眼球摘除率，提高患者视觉预后。

本发明提供的mTOR抑制剂在制备治疗脉络黑色素瘤药物中的应用，所述的mTOR抑制剂为PP242，,分子式为C₁₆H₁₆N₆O，其结构式如式(1)所示。

较佳地，药物中的所述的mTOR抑制剂通过诱导出肿瘤细胞原纤毛从而有效调整肿瘤细胞增殖及迁移起效。

较佳地，所述的mTOR抑制剂的终浓度为1μmol/L。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明发现，PP242能显著抑制脉络膜黑色素瘤以及结膜黑色素瘤的生长，通过抑制mTOR，使肿瘤细胞重新恢复原纤毛结构，从而能够使得细胞可以感知细胞外界状态，达到抑制肿瘤生长的效果。

附图说明：

图1A为本发明实施例一中的ARL13B免疫荧光实验的显微放大图。

图1B为本发明实施例一中的ARL13B组织免疫荧光的显微放大图。

图1C为本发明实施例一针对图1A中的纤毛比例统计图。

图1D为本发明实施例一针对图1B中的纤毛比例统计图。

图2为本发明实施例二中的免疫荧光实验的显微放大图以及定量统计图。

图3A为本发明实施例三中的CCK8实验细胞的细胞生存曲线图。

图3B为本发明实施例三中的平板克隆增殖实验结果图。

图4为本发明实施例四中的Transwell细胞迁移实验结果图。

图5A为本发明实施例五中的westernblot蛋白定量实验结果图。

图5B为本发明实施例五中的LC3免疫荧光实验的显微放大图。

图5C为本发明实施例五中的针对图5B的定量统计图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步地说明，以更好地理解本发明。

实施例一：

实验名称：免疫荧光实验

实验材料：脉络膜黑色素瘤组织芯片(Me1004a)，购自西安艾丽生物科技有限公司；ARL13B、r-tublin抗体及第二抗体，购自Abcam(艾博抗(上海)贸易有限公司)。

实验步骤：将组织芯片置于湿盒内，铺加PBS于组织芯片上。稀释ARL13B、r-tublin抗体于4℃，13500g离心2min。在组织芯片的一端吸去玻片上的PBS缓冲液，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1h。以PBS冼玻片3次(5min/次)，从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。稀释的第二抗体于4℃，13500g离心2min。将第二抗体加于组织芯片上，置加湿盒中室温温育1h，以PBS洗玻片3次(5min/次)。盖盖玻片，结果如图1所示：图1A显示出正常细胞ARPE19中纤毛结构广泛存在，而肿瘤细胞株OCM1、OCM1a、OM431中缺失原纤毛结构，图1B显示出组织芯片显示，肿瘤组织纤毛比例明显降低，且随肿瘤组织转移而减少，图1C显示出正常细胞的纤毛比肿瘤细胞更加丰富，图1D显示出肿瘤组织中纤毛比例随着迁移而逐渐降低。

实施例二：

实验名称：免疫荧光实验

实验材料：ARL13B、r-tublin抗体及第二抗体，购自Abcam(艾博抗(上海)贸易有限公司)。