[发明专利]一种马铃薯茎段组织培养基及其培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种马铃薯茎段组织培养基，还包括马铃薯试管苗茎段一步成苗培养方法。

背景技术

马铃薯(Solanum Tuberosum L.)是茄科茄属一年生草本块茎植物，是重要的粮、菜、饲料和工业原料兼农作物，在我国农业生产中占有相当重要的地位。为了创新种质资源，组织培养技术被广泛的应用于马铃薯育种研究中，并取得了显著成果。

近年来,生物技术的迅猛发展为马铃薯的研究和生产带来了勃勃生机,通过组织培养和遗传转化进行马铃薯遗传改良，已成为马铃薯分子育种的重要方面。然而，无论是遗传转化体系的建立，还是突变体的筛选、优良种苗的快速繁殖及体细胞杂交等技术都有赖于组织培养再生环节。再生体系的建立是利用生活的植物细胞具有全能性的理论基础,通过愈伤组织再生形成新的植株,即通过对外植体进行愈伤组织诱导，再将愈伤组织转移到分化培养基上分化成苗来获得再生植株。目前马铃薯再生体系中采用的外植体主要有试管苗的叶片、茎段、叶柄、根等，主要采用外植体-愈伤组织(诱导培养)-分化幼苗(分化培养)-生根(生根培养)等多个培养程序。即将外植体进行愈伤组织培养，诱导出愈伤组织，再将愈伤组织转接到分化培养基中再生植株。经多步培养途径烦琐、再生率普遍较低且诱导时间较长，而且再生系统易受基因型、外植体种类、植物激素的种类及浓度、培养条件和操作技术水平等诸多因素影响，使马铃薯不同品种的再生系统存在较大差异。本专利针对这些问题研究提出了以茎段为外植体的一步成苗培养基，该培养基使马铃薯试管苗茎段组织培养一步成苗，具有再生周期短，繁殖系数和再生频率高，基因型适应性广谱，易操作，培养程序简单等优点，为马铃薯优良种苗快速繁殖、突变体筛选及品种改良提供一条有效途径。

发明内容

本发明的主要目的在于针对马铃薯再生体系研究中存在的再生频率低、诱导时间长，不同基因型之间诱导再生条件存在差异等问题，提供一种一步成苗的马铃薯茎段组织培养基及其培养方法。马铃薯试管苗茎段在形成愈伤组织后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上分化成苗，提高了马铃薯试管苗茎段愈伤组织的再生效率、缩短了培养时间、简化了操作步骤，且基因型适应性广谱，为马铃薯优良种苗快速繁殖、突变体筛选及品种改良提供一条有效途径。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为:

一种马铃薯茎段组织培养基及其培养方法，包括如下步骤：

A.培养基制备

每升MS培养基中添加 1～3mg 6-苄基氨基嘌呤、0.01～0.1mg萘乙酸、2.5～7.5mg赤霉素、50-100mg肌醇、25～30g食用白糖和3～4.5g琼脂；

Ｂ.培养基处理

培养基加热至沸腾，加热过程中不断搅拌，待琼脂完全溶解后将pH值调整为5.8～6.0；分装后高压蒸汽灭菌，灭菌后的培养基静置降温凝固；

C.接种苗处理

选取苗龄20～30天的马铃薯无菌试管苗，无菌条件下，切取0.5cm～1cm不带腋芽的茎段，接种于步骤B的培养基；

D.接种苗培养

将步骤C接种茎段的培养基置于温度为21±2℃、光照强度3500～4000LX、光照时间16h/天的条件下培养；

E.分段培养

培养15天，茎段膨大，有愈伤组织形成，表面形成颗粒状物质或瘤状突起；培养25～30天，茎段愈伤组织分化丛生芽；培养28-35天，获得马铃薯再生植株。

所述步骤B中培养基加热至沸腾，加热过程中不断搅拌，待琼脂完全溶解后将pH值调整为5.8～6.0；分装后高压蒸汽灭菌，蒸汽温度120℃、压力1.5Mpa条件下消毒15～20min，灭菌后的培养基静置降温凝固。

所述每升MS培养基中添加3mg 6-苄基氨基嘌呤、0.01mg萘乙酸、5mg赤霉素、100mg肌醇。

本发明的有益效果为：