[发明专利]普通小麦中维生素B6含量的高效液相色谱测定方法

权利要求书

1.一种普通小麦中维生素B6的提取方法，包括如下步骤：

将普通小麦粉制成全麦粉，在乙醛酸和硫酸亚铁存在的条件下，所述全麦粉在醋酸钠水溶液中进行酶解；所述酶解结束后的体系经过滤后的滤液进行衍生化，然后加入乙酸振荡后离心，取上清液，即得到维生素B6；

所述酶解采用复合酶，所述复合酶为木瓜蛋白酶、酸性磷酸酶、α-淀粉酶和还原性谷胱甘肽的复合物。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述醋酸钠水溶液的摩尔浓度为0.05M；

所述醋酸钠水溶液的pH值为4.50～4.52；

所述全麦粉与所述醋酸钠水溶液的质量体积比为2.5～5g：25～50mL。

3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述酶解的温度为36～38℃，时间为16～18h；

所述全麦粉、所述木瓜蛋白酶、所述酸性磷酸酶与所述α-淀粉酶的质量比为2.5g：0.05～0.1g：0.01～0.02g：0.005～0.01g，所述全麦粉与所述还原性谷胱甘肽的用量比为2.5g：250～500μl。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的提取方法，其特征在于：所述乙醛酸水溶液的摩尔浓度为1M，所述硫酸亚铁水溶液的质量分数为2％。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的提取方法，其特征在于：所述全麦粉与所述乙醛酸水溶液的用量比为1g：0.5ml；

所述全麦粉与所述硫酸亚铁水溶液的用量比为1g：80μl。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的提取方法，其特征在于：所述衍生化采用的衍生化试剂为硼氢化钠水溶液；

所述硼氢化钠水溶液的摩尔浓度为0.1M。

7.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于：所述滤液、所述硼氢化钠水溶液与所述乙酸的体积比为10：9：1；

所述离心在如下条件下进行：

温度可为2～8℃；

转速为4000～4500×g；

时间可为10～15min。

8.一种普通小麦中维生素B6含量的测定方法，包括如下步骤：

(1)制作标准曲线

1)配制至少3种不同浓度的维生素B6标准品的水溶液；

2)将所述维生素B6标准品的水溶液进行如权利要求4所述提取方法中的所述衍生化和所述离心步骤，得到的上清液过醋酸纤维膜得到维生素B6标准品溶液；

3)将所述维生素B6标准品溶液进行高效液相检测，得到不同浓度所述维生素B6标准品溶液的峰面积，以所述峰面积为横坐标，以所述维生素B6标准品溶液的浓度为纵坐标，制作标准曲线；

(2)测定普通小麦中维生素B6的含量

按照权利要求1-4所述方法得到的维生素B6过所述醋酸纤维膜后进行所述高效液相检测，得到所述维生素B6的峰面积，根据所述标准曲线，并经折算后即得到所述普通小麦中维生素B6的含量。

9.根据权利要求8所述的测定方法，其特征在于：所述高效液相检测的条件如下：

色谱柱：Waters XTerra RP18色谱柱；

流动相：A相为甲醇，B相为含有5mM庚烷磺酸钠的摩尔浓度为0.05M的磷酸二氢钾溶液，所述A相与所述B相的体积比为3：97，用磷酸调pH为2.5；洗脱方式为等度洗脱；柱温为：35℃；进样体积为20μL；流速为0.7mL/min。