[发明专利]一种荧光标记的含糖醛酸的糖分子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种荧光标记的含糖醛酸的糖分子，其特征在于所述荧光标记的含糖醛酸的糖分子经过如下标记过程获得：

其中，所述R为含有羧基的多糖、低聚糖、寡糖或糖衍生物分子，所述荧光分子为具有氨基的花青染料Cy3、Cy5和Cy7中的至少一种。

2.权利要求1所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：

(1)羧基活化：将含糖醛酸的糖分子溶解在2-吗啉乙烷磺酸缓冲液中，再加入1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，混合均匀形成反应体系，搅拌反应，反应结束后用透析袋透析或凝胶色谱柱纯化，透析液或糖分子洗脱组分减压浓缩后冷冻干燥得活化的糖分子；

(2)荧光标记：将步骤(1)活化的糖分子溶解在磷酸盐缓冲液中，加入含有-NH₂的荧光分子，形成总反应溶液，搅拌反应2～24h，浓缩，将浓缩液转移至透析袋中透析脱盐，透析内液减压浓缩，干燥后得荧光标记的含糖醛酸的糖分子。

3.根据权利要求书2所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺在反应体系中的摩尔浓度均为糖分子中羧基占反应体系的摩尔浓度的2～20倍，反应时间为2～24h。

4.根据权利要求书2所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中加入的荧光分子在总反应溶液的最终摩尔浓度为羧基占反应体系的摩尔浓度的0.1～10倍。

5.根据权利要求书2所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子的制备方法，其特征在于：将步骤(2)所述荧光标记的含糖醛酸的糖分子进行如下纯化步骤：将荧光标记的含糖醛酸的糖分子用凝胶色谱柱纯化，采用示差检测器和荧光检测器联用检测，收集示差检测器和荧光检测器重合信号峰；

或将步骤(2)所得荧光标记的糖分子经透析袋透析，检测透析外液电导率不再变化，糖分子组分经减压浓缩后冷冻干燥得荧光标记的糖分子。

6.根据权利要求书5所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子的制备方法，其特征在于：所述凝胶色谱柱填料为Sephadex G-10、Sephadex G-15、Sephadex G-25或Bio Gel P2、P4或P6。

7.根据权利要求书5所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子的制备方法，其特征在于：所述步骤透析袋的截留分子量为1kDa～10kDa。

8.权利要求书1所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子在制备用于检测糖分子在体内代谢的检测剂中的应用。

9.权利要求书1所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子在制备用于检测糖分子在组织器官中分布的检测剂中的应用。

10.根据权利要求书9所述的荧光标记的含糖醛酸的糖分子在制备用于检测糖分子在组织器官中分布的检测剂中的应用，其特征在于：所述荧光标记的含糖醛酸的糖分子的检测时间为0.01～24h。