[发明专利]斜带石斑鱼补体C1INH基因、载体、重组菌株和蛋白及其应用

说明书

本发明公开了石斑鱼rC1INH‑Nonserpin蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或者是SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰且具有同等或更高活性的蛋白。本发明首次获得了石斑鱼的补体C1INH基因序列以及C1INH序列上的功能片段rC1INH‑Nonserpin核苷酸序列，不仅丰富了石斑鱼的基因库，而且可应用于制备重组蛋白、鱼类免疫制剂或饲料添加剂，为石斑鱼的生理免疫研究提供了新的理论与实践基础。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种rC1INH-Nonserpin 蛋白及编码该蛋白的基因、含有该基因的载体及其应用；还涉及一种补体C1INH蛋白及编码该蛋白的基因、含有该基因的载体及其应用。

背景技术

补体在巨噬细胞活化因子所调控的动物免疫系统中扮演着一个调控中枢，能够有效通过提高免疫细胞对入侵病菌的吞噬力并同时刺激超氧化物酶的产生，从而挺高机体的免疫能力。然而，补体过度的激活会造成机体的损伤。在补体系统当中，补体C1抑制物(C1INH)是补体元件中唯一的一个负调控元件。补体C1INH是一个单链分子，一般由478个氨基酸残基组成，链内存在两对二硫键，N末端为Nonserpin结构域，C末端为丝氨酸蛋白酶抑制蛋白结构域。在功能上，C1INH能够负调控三条补体激活途径，其能够通过与C1r和C1s的活性部分形成共价的酯键而抑制活性，从而抑制了补体的经典途径； C1INH可以通过抑制MBSP-1和MBSP-2的活性，从而抑制补体的凝集素途径；C1INH也可以通过B因子与C3b的结合，从而抑制补体的旁路途径。 C1INH是一个多功能的大分子，其除了能够抑制补三条补体途径之外，C1INH的存在还可以有效地拮抗LPS的毒副作用，抑制激肽释放酶原，凝血因子XII，凝血因子XI和纤溶酶的活性，对炎症反应具有重要的调控作用。

斜带石斑鱼（Epinepheluscoioides）属于鲈形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，石斑鱼亚科(Epinephelinae)，石斑鱼属(Epinephelus)，是暖水性的礁栖鱼类，在印度洋和太平洋的热带、亚热带海域广泛分布。石斑鱼属于名贵海产鱼类之一，其肉质鲜美，倍受各地消费者的喜爱，经济价值巨大。但是，由于面对着目前的急剧的气候变化灾害和严重污染的水质问题，从而导致了其致病率和死亡率居高不下，对石斑鱼的人工养殖造成严重的经济打击，也是一个难以解决的问题。如何增强石斑鱼的抗逆能力，提高养殖存活率，是目前亟待解决的难题。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种石斑鱼rC1INH-Nonserpin蛋白。

本发明的另一目的在于提供编码上述石斑鱼rC1INH-Nonserpin蛋白的基因。

本发明的另一目的在于提供一种石斑鱼补体C1INH的结构域蛋白，即石斑鱼补体rC1INH-Nonserpin蛋白。

本发明的另一目的在于提供编码上述石斑鱼补体C1INH蛋白的基因。

本发明的另一目的在于提供含有石斑鱼补体C1INH蛋白基因及功能片段rC1INH-Nonserpin的克隆载体。

本发明的另一目的在于提供含有石斑鱼补体C1INH蛋白基因及功能片段rC1INH-Nonserpin的表达载体。

本发明的另一目的在于提供一种石斑鱼补体C1INH功能片段rC1INH-Nonserpin重组蛋白及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供石斑鱼rC1INH-Nonserpin蛋白和/或C1INH蛋白在提高石斑鱼免疫力中的应用。

本发明所采取的技术方案是：