[发明专利]同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器及其方法体系

权利要求书

1.一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器的方法，其特征在于包括：

(1)电极抛光并用体积比为3:1的H₂SO₄和H₂O₂处理；

(2)将含有信标探针XB1和信标探针XB2的两种信标探针溶液修饰于电极表面；

(3)修饰MCH封闭未特异性结合的位点；

(4)将均相反应产物修饰于电极表面上修饰后的信标探针；

(5)用磁力搅拌器在PBS溶液中清洗修饰后的电极；

(6)采用三电极体系，读取电极上的电信号变化，根据电极表面产生的电流大小获得水胺硫磷和啶虫脒的检测结果；

所述方法步骤(1)～(4)具体为：

(1)电极抛光后，将电极浸泡在体积比为3:1的H₂SO₄和H₂O₂的混合液中，孵育20min后用超纯水彻底洗涤；

(2)将2μL的浓度为10μM的信标探针XB1溶液和4μL的浓度为10μM的信标探针XB2溶液滴加到电极表面；

(3)修饰MCH封闭未特异性结合的位点；

(4)采用以下方式制备均相反应产物，再修饰于电极表面上修饰后的信标探针：

(4.1)将2μL的浓度为100nM的发卡HAP1溶液和2μL的浓度为100nM的发卡HAP2溶液加入到20μL的Phi29 DNA聚合酶的缓冲溶液中；

(4.2)加入两种待测目标物水胺硫磷和啶虫脒溶液，在37℃下孵育30min；

(4.3)加入2μL的浓度为100nM的引物1溶液和2μL的浓度为100nM的引物2溶液，并加入1μL的浓度为10unit μL^-1的Phi29 DNA聚合酶、2μL的浓度为5mM的dNTP和1μL的浓度为10unitμL^-1的NB.BbvCI，在37℃孵育1h；

所述的XB1如SEQ ID NO.1，所述的XB2如SEQ ID NO.2；

所述的发卡HAP溶液中两种基因序列分别为发卡HAP1和发卡HAP2，发卡HAP1如SEQ IDNO.3，发卡HAP2如SEQ ID NO.4，两种基因序列的含量相同。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器的方法，其特征在于：所述含有信标探针XB1的信标探针溶液和含有信标探针XB2的信标探针溶液的体积比为1:2。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器的方法，其特征在于：所述步骤(4)的均相反应产物是通过以下步骤的均相反应获得：

(4.1)将含有两种基因序列的发卡HAP溶液加入到Phi29 DNA聚合酶的缓冲溶液中；

(4.2)加入两种待测目标物溶液，在37℃孵育30min；

(4.3)加入含有两种引物序列的溶液，并加入Phi29 DNA聚合酶溶液、dNTP溶液和NB.BbvCI溶液，在37℃孵育1h。

4.根据权利要求3所述的一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器的方法，其特征在于：所述的含有两种引物序列的溶液的两种引物序列分别为引物1和引物2，引物1如SEQ ID NO.5，引物2如SEQ ID NO.6。

5.根据权利要求1所述的一种同时检测水胺硫磷和啶虫脒的电化学传感器的方法，其特征在于：所述电极采用金电极，金电极用H₂SO₄和H₂O₂的处理时间是20min。