[发明专利]截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白及其应用

说明书

本发明涉及截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白及其应用。具体地，本发明涉及一种截短型HPV16 L1蛋白、编码其的核苷酸、包含所述核苷酸的载体、重组Bacmid、重组杆状病毒、包含所述重组杆状病毒的昆虫细胞、由所述HPV16L1蛋白组成的病毒样颗粒、含该病毒样颗粒和疫苗佐剂的疫苗、以及其在预防HPV感染或HPV感染相关疾病中的用途。

技术领域

本发明涉及一种新的截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白、由其组成的病毒样颗粒、含该病毒样颗粒和疫苗佐剂的疫苗及其在预防HPV感染或HPV感染相关病变中的用途。

背景技术

目前已分离鉴定了200多型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)，分为嗜黏膜组和嗜皮肤组。黏膜组的HPV主要感染泌尿生殖道、肛门肛周及口咽部的黏膜及周围皮肤，诱发各种良恶性病变。根据诱发病变的性质不同，可分为诱发恶性肿瘤的高危型(包括HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68等)、可疑高危型(HPV26,30,53,66,67,69,70,73,82,85等)、尚未确定型(HPV34,42,43,54,71,81,83,97,102,114等)，及诱发疣状增生等良性病变的低危型(HPV6,7,11,13,32,40,42,44,61,62,72,74,81,83,84,86,87,89,90,91,106等)。嗜皮肤组主要感染上述部位之外的皮肤组织，诱发皮肤疣状增生，并与某些皮肤癌的发生密切相关。

高危型HPV感染相关的恶性肿瘤目前已确定的有：宫颈癌、阴道癌、阴唇癌、阴茎癌、肛门肛周癌、口咽癌、扁桃体癌、口腔癌，其中以宫颈癌的危害最大。宫颈癌是世界范围第三高发的妇女恶性肿瘤，年发病率约52.7万，其中亚洲地区28.5万；中国的年发病数7.5万。

研究发现病毒的主要外壳蛋白L1体外表达后可组装成L1病毒样颗粒(VLP)，L1VLP的结构及形态与病毒颗粒的天然结构类似，具有很强的免疫原性。目前国外上市的三种HPV预防性疫苗均为HPV L1 VLP疫苗，包括葛兰素史克的HPV16/18双价疫苗、默沙东的HPV16/18/6/11四价疫苗及HPV16/18/58/52/31/33/45/6/11九价疫苗，人群免疫后，免疫活性好、预防感染及感染相关疾病的保护效率高。鉴于HPV16是世界范围内的优势流行病毒株，约53.5％的宫颈癌是由HPV16感染引起的，其余46.5％的宫颈癌由其它约22种高危型和可疑高危型HPV感染引起。因此深入研究HPV16 L1VLP疫苗具有意义。

目前多种不同的表达体系，包括昆虫细胞表达体系、酵母表达体系、大肠杆菌表达体系及植物表达体系，均可用于HPV16 L1VLP的表达生产。研究发现HPV16 L1全长蛋白(White W,Wilson S,et al.J.Virol.1999；73(6):4882-4889.)、N端截短的突变体蛋白(Chen XS,Casini G,et al.J.Mol.Biol.2011；307:173-182.)、C端截短的突变体(专利CN1976718A，CN102586287，CN104418942A)、及联合N端截10个氨基酸及C端截短22个氨基酸的突变体蛋白(Varsani A,Williamson AL,et al.Vir.Res.2006；122:154-163.)，采用特定的技术均可以组装成HPV16L1 VLP(全长HPV16 L1蛋白序列为NCBI数据库AAC09292.1序列，N端截短从N端第一个氨基酸M开始)。研究还发现了多种提高HPV16 L1蛋白表达水平的方法，如C端截短31氨基酸可以使表达水平提高1.58倍，消除N端前129个核苷酸内的抑制性DNA序列，亦可提高表达水平，联合采用密码子优化、消除潜在转录终止位点、消除潜在剪切位点、简化mRNA二级结构等方法也可以提高表达水平。