[发明专利]EGFR基因检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种EGFR基因检测试剂盒。

背景技术

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是细胞表面受体酪氨酸激酶HER/ErbB家族成员，广泛分布于人体多种正常组织的细胞膜上，对细胞的增殖、迁移起到重要的作用。酪氨酸激酶抑制剂（TKI）是针对EGFR靶向治疗的药物，影响TKI疗效最重要的因素为EGFR基因突变，与酪氨酸激酶抑制剂（TKI）药物疗效相关的突变主要位于EGFR基因的18、19、20和21号外显子区域上。因此，检测EGFR基因突变对于指导病人临床用药具有重要的参考价值。

目前常用的EGFR基因突变检测方法主要有Sanger法、实时荧光定量PCR等方法。但Sanger法只能在EGFR突变比例达到20%以上时才能检测出基因突变，实时荧光定量PCR的检测灵敏度相对较高，可以达到1-5%，但其假阳性率高。

因此，需要一种新的检测EGFR基因突变的试剂盒及检测方法，使得EGFR基因突变的假阳性率低，检测灵敏度高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种EGFR基因检测试剂盒及检测方法，旨在解决现有技术中EGFR检测灵敏度低，准确性低的问题。

一种EGFR基因检测试剂盒，包括用于对多个EGFR基因待检测位点中的至少一个进行特异性扩增的引物组，所述多个EGFR基因待检测位点包括rs28929495、rs121913428、rs121913421、rs397509368、rs121913442、rs121913438、rs397517098、rs727504339、rs121913435、rs121913440、rs121913436、rs727504258、rs727504233、rs121913422、rs727503016、rs727503015、rs727504332、rs121913465、rs121434569、rs121434568中的至少一个；所述用于特异性扩增含rs28929495和/或rs121913428片段的引物组包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:2中的至少一对；

用于特异性扩增含rs121913421、rs397509368、rs121913442、rs121913438、rs397517098、rs727504339、rs121913435、rs121913440、rs121913436、rs727504258、rs727504233、rs121913422、rs727503016、rs727503015、rs727504332中至少一个位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:6中的至少一对；

用于特异性扩增含rs121913465位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:10中的至少一对；

用于特异性扩增含rs121434569位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:10中的至少一对；

用于特异性扩增含rs121434568位点的片段的引物组包括SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:16中的至少一对。

优选的，所述试剂盒还包括R接头，所述R接头为具有发夹结构的单链核酸分子，用于与含待检测位点的EGFR基因扩增产物连接。

优选的，所述R接头序列如SEQ ID NO:19所示。