[发明专利]ACE基因检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，一种ACE基因检测试剂盒，包括用于对含rs4646994位点的核酸片段进行特异性扩增的引物组，所述引物组包括上游引物SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4，以及下游引物SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。本发明还提供了一种基因检测方法。本发明的试剂盒通过采用特异性扩增引物组对含上述rs4646994位点的核酸片段进行扩增，使得对ACE基因突变的检测灵敏度高、假阳性率低；本发明的试剂盒采用第二代高通量基因测序技术进行检测，使得检测周期短，通量高。

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种ACE基因检测试剂盒及检测方法。

背景技术

人类乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase gene，ALDH)是一种四联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。目前已发现ALDH 有19 种同工酶，主要有ALDH1～4四种，其中以ACE最为重要。

硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现小三甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮（NO）所介导。但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛，使心肌严重缺血加重。近来发现，ACE基因与硝酸甘油转化为NO密切相关。此外，ACE在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。研究发现，突变型基因ACE*2的存在能导致ACE活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。

通过对患者的ACE基因进行检测，得到特定位点的基因型，以基因检测结果作为中间结果的信息的方法，不属于疾病的诊断方法；以基因型的检测结果来确定药物的选择，就可以实现个体化用药，避免对免疫抑制剂不良反应。

目前常用的ACE基因突变检测方法主要采用微阵列芯片法。但基因芯片法灵敏度低、假阳性率高、耗时较长，通量小。

因此，需要一种新的检测ACE基因基因突变的试剂盒及检测方法，使得对ACE基因突变的灵敏度高，假阳性率低，且检测周期短。

发明内容

本发明的目的在于提供一种ACE基因检测试剂盒及检测方法，旨在解决现有技术中ACE基因检测灵敏度低、假阳性率高、周期长，通量小的技术问题。

一种ACE基因检测试剂盒，包括用于对含rs4646994位点的核酸片段进行特异性扩增的引物组，所述引物组包括上游引物SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4，以及下游引物SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。

优选的，所述ACE基因检测试剂盒还包括接头，所述接头包括接头A、接头B、接头C、接头D中的至少一种；所述接头A由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成；所述接头B由SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:12组成；所述接头C由SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14组成；所述接头D由SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16组成。

优选的，所述ACE基因检测试剂盒还包括测序引物SEQ ID NO:17，所述测序引物用于对含rs4646994位点的文库分子进行测序。

优选的，所述测序引物的5’末端经过磷酸化修饰。

一种ACE基因检测方法，包括以下步骤：

A、利用扩增引物组，对含rs4646994位点的样本进行扩增，得扩增产物；其特征在于，所述引物组包括上游引物SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4，以及下游引物SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8；