[发明专利]确定细黄连霉菌培养物中细菌数量的方法

说明书

本发明属于生物领域，涉及细菌的计数方法，具体为一种确定细黄连霉菌培养物中细菌数量的方法，包括以下步骤：取待检样品设置梯度稀释倍数，得到梯度稀释溶液，测定并记录OD₆₀₀值与细菌数量，根据统计方法建立起细菌数量与稀释倍数和OD₆₀₀值的函数关系，得到细菌数量与稀释倍数和OD₆₀₀值的相关系数；利用所述函数关系和所述相关系数计算出细黄连霉菌液体培养物的细菌数量；所述相关系数为2.5。本发明实现了利用仪器自动化检测和计数，确定细黄连霉菌培养物中细菌数量的方法简便、快速；确定了检测所采用的光波波长和所测定的OD值与细黄连霉菌数量间的对应关系，结果准确。

技术领域

本发明属于生物领域，特别涉及细菌的计数方法，具体为一种确定细黄连霉菌培养物中细菌数量的方法。

背景技术

近来有关细黄连霉菌的研究引起了越来越多的关注。其中的菌落计数是微生物制剂有关研究的基础，如研究细黄连霉菌的培养条件、增殖特性、使用剂量、制剂含菌量等等均离不开细菌计数。细菌计数的方法有计数器测定法、电子计数器计数法、平板菌落计数法、比浊法、测定细胞重量法、测定细胞总氮量或总碳量、颜色改变单位法等，其中比浊法和菌落计数法可满足绝大多数细菌的计数且也是最常用的方法。

菌落计数法是根据每个活的细菌能培养长出一个菌落的原理设计的，不需要特殊仪器，操作简单，测定时取一定容量的菌悬液作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数，此法灵敏度高，是一种检测活菌数的好方法，但该法费时，至少需24小时才能出结果，且需判断选择好适宜的稀释度(一般选取菌落数在30-300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确)，因此其操作的复杂性、花费及时间等均增大。

比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。但光密度或透光度除了受菌体浓度影响之外，还受细胞大小、形态、培养液成分以及所采用的光波长等因素的影响，且通常只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品或组织样品等，不能用此法测定，但此法简便快捷。比浊法测定细菌的数量主要的关键是如何排除样品中的干扰物、所采用的光波波长的确定和测定的OD值与细菌数量间对应关系，否则只能判断出相对的细菌数目而不能确定出准确的细菌数目。目前，利用紫外分光光度计来测定细黄连霉菌数量还需摸索。

发明内容

本发明的目的在于提供一种确定细黄连霉菌培养物中细菌数量的方法，该方法快速简单，使用于细黄连霉菌液体培养液中细菌的技术。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

确定细黄连霉菌培养物中细菌数量的方法，包括以下步骤：取待检样品设置梯度稀释倍数(表1)，得到梯度稀释溶液，测定并记录OD₆₀₀值与细菌数量，根据统计方法建立起细菌数量与稀释倍数和OD₆₀₀值的函数关系，得到细菌数量与稀释倍数和OD₆₀₀值的相关系数；利用所述函数关系和所述相关系数计算出细黄连霉菌液体培养物的细菌数量；所述相关系数为2.5。

表1、稀释倍数及菌落总数