[发明专利]一种应用微流体芯片分离外泌体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及到生物技术领域，特别设计应用微流体芯片分离外泌体的方法。

背景技术

外泌体(exosomes)是一种直径约为30-150nm具有双层质膜结构的囊泡，由细胞通过胞吐作用释放至细胞外隙或生物学体液中。近年来，外泌体受到越来越多的关注，成为新的研究热点，外泌体内包含来源细胞所特有的mRNAs、microRNAs和蛋白质等多种生物分子，在信号传导和免疫系统中起重要作用，更有研究表明外泌体与肿瘤的转移、神经系统疾病等密切相关，其内容物也是多种疾病临床检测和诊断的标志分子。

目前外泌体的分离技术包括超速离心法、过滤离心法、密度梯度超速离心法、免疫磁珠结合超速离心法和色谱法等。这些技术对仪器设备要求高、操作繁琐耗时，因此需要有效的外泌体捕获技术解决这些问题。

基于以上所述，本发明拟应用修饰了生物特异性分子的微阵列柱流体芯片捕获外泌体，能够方便，省时的分离外泌体，应用于科研和临床。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种应用微流体芯片分离外泌体的方法，该微流控芯片结合了微阵列柱和特异性亲和识别生物分子，实现对细胞培养上清和人类体液中外泌体的捕获。

本发明的技术方案：一种应用微流体芯片分离外泌体的方法，包括以下步骤：

1)、样本的前处理：无菌条件下收集细胞培养上清或人体体液样本，用PBS调整样本的浓度，经过离心操作对样本进行初步去除杂质；再用0.22um微孔滤膜过滤样本，进一步去除杂质；

2)、分离外泌体：将经过初步处理的样本通过进样器或进样泵通入微流体芯片，进行特异性分离捕获外泌体。

所使用的微流体芯片为具有蛇形分离通道，在所述蛇形分离通道上设置交叉排列的微柱阵列，所述微柱阵列顶部可为圆形、三角形、四边形等多边形中的一种。

所述样本的前处理方法为4度条件下300×g离心10min，再2000×g离心20min后弃沉淀，l0,000×g离心30min后弃沉淀；再用0.22μm的滤膜过滤。

所用的PBS缓冲液的浓度为0.01mol/L。

所述样品通入芯片的流速为5-50ul/min。

所用鉴定方法为扫描电镜和Western Blot分析。

本发明的优点在于：使用修饰特异性生物分子的微流体芯片，操作简单方便，减少了试样和试剂的消耗量，分离纯度高，降低了成本。

附图说明

图1分离外泌体扫描电镜鉴定图；

图2分离外泌体western Blot鉴定图；

图3分离外泌体扫描电镜鉴定图；

图4分离外泌体western Blot鉴定图；

图5分离外泌体扫描电镜鉴定图；

图6分离外泌体western Blot鉴定图。

具体实施方式

下面就具体实施方式，进一步阐明本发明，应理解这些实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。为了理解本发明，下面对本发明进行进一步的详细说明。

一种应用微流体芯片分离外泌体的方法，包括以下步骤：

1)、样本的前处理：无菌条件下收集细胞培养上清或人体体液样本，用PBS调整样本的浓度，经过离心操作对样本进行初步去除杂质；再用0.22um微孔滤膜过滤样本，进一步去除杂质；

2)、分离外泌体：将经过初步处理的样本通过进样器或进样泵通入微流体芯片，进行特异性分离捕获外泌体。

所使用的微流体芯片为具有蛇形分离通道，在所述蛇形分离通道上设置交叉排列的微柱阵列，所述微柱阵列顶部可为圆形、三角形、四边形等多边形中的一种。

所述样本的前处理方法为4度条件下300×g离心10min，再2000×g离心20min后弃沉淀，l0,000×g离心30min后弃沉淀；再用0.22μm的滤膜过滤。

所用的PBS缓冲液的浓度为0.01mol/L。

所述样品通入芯片的流速为5-50ul/min。

所用鉴定方法为扫描电镜和Western Blot分析。

实施例1