[发明专利]靶向mesothelin的第四代嵌合抗原受体的制备方法和用途

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：

(1)含有依次连接的抗间皮素单链抗体的编码序列、人CD8α铰链区的编码序列、人CD8跨膜区的编码序列、人CD28胞内区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、任选含有EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列、和任选含有人IL-15片段的编码序列的多核苷酸序列；和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列，

所述抗间皮素单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第23-128位氨基酸序列所示；所述抗间皮素单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第141-259位氨基酸序列所示；所述人CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第260-306位氨基酸序列所示；所述人CD8跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第307-328位氨基酸序列所示；所述人CD28胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第329-369位氨基酸序列所示；所述人41BB胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第370-417位氨基酸序列所示；所述人CD3ζ胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第418-528位氨基酸序列所示；所述EGFR的片段的氨基酸序列如SEQ IDNO:2第577-911位氨基酸序列所示；所述人IL-15的片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第985-1098位氨基酸序列所示，

所述多核苷酸序列还含有2A肽和人IL-15信号肽的编码序列，所述2A肽和人IL-15信号肽设置于所述IL-15片段的N端。

2.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，

所述抗间皮素单链抗体的轻链可变区的编码序列如SEQ ID NO:1第67-384位多核苷酸所示；所述抗间皮素单链抗体的重链可变区的编码序列如SEQ ID NO:1第421-777位多核苷酸所示；所述人CD8α铰链区的编码序列如SEQ ID NO:1第778-918位多核苷酸所示；所述人CD8跨膜区的编码序列如SEQ ID NO:1第919-984位多核苷酸所示；所述人CD28胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第985-1107位多核苷酸所示；所述人41BB胞内区的编码序列如SEQID NO:1第1108-1251位多核苷酸所示；所述人CD3ζ胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第1252-1584位多核苷酸所示；所述EGFR的片段的编码序列如SEQ ID NO:1第1743-2733位多核苷酸所示；

所述人IL-15胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第2953-3294位多核苷酸所示。

3.如权利要求1或2所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列在所述抗间皮素单链抗体的编码序列前还含有信号肽的编码序列。

4.如权利要求3所述的多核苷酸序列，其特征在于，在所述抗间皮素单链抗体的编码序列前的所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-22位氨基酸序列所示。

5.如权利要求4所述的多核苷酸序列，其特征在于，在所述抗间皮素单链抗体的编码序列前的所述信号肽的编码序列如SEQ ID NO:1第1-66位多核苷酸所示。

6.如权利要求1或2所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列还含有2A肽和GM-CSF受体α链信号肽的编码序列，所述2A肽和GM-CSF受体α链信号肽设置于所述EGFR片段的N端。

7.如权利要求6所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述GM-CSF受体α链信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第555-576位氨基酸所示。

8.如权利要求6或7所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述GM-CSF受体α链信号肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1663-1742位多核苷酸所示。