[发明专利]弹涂鱼多型卵黄蛋白原Vtg基因全长序列及其克隆方法有效
| 申请号： | 201710163952.9 | 申请日： | 2017-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN106831972B | 公开（公告）日： | 2020-11-03 |
| 发明（设计）人： | 吴美琴;陈渊戈;葛珂珂;练青平 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学;中国水产科学研究院东海水产研究所;宁海县三门湾现代渔业园区管委会;浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/6851;C12Q1/6879 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 弹涂鱼多型 卵黄蛋白 vtg 基因 全长 序列 及其 克隆 方法 | ||
1.一种弹涂鱼卵黄蛋白原，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种编码如权利要求1所述的弹涂鱼卵黄蛋白原的弹涂鱼卵黄蛋白原基因，其特征在于，所述基因包括编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的弹涂鱼卵黄蛋白原的弹涂鱼VtgAa基因。
3.如权利要求2所述的弹涂鱼卵黄蛋白原基因，其特征在于，弹涂鱼VtgAa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1中第3位～第5000位所示。
4.一种如权利要求1所述的弹涂鱼卵黄蛋白原在作为判断性别和雌鱼成熟度的指示蛋白中的用途。
5.一种克隆弹涂鱼VtgAa基因序列的方法，其特征在于，所述VtgAa基因编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的弹涂鱼卵黄蛋白原；
所述方法包括如下步骤：
S1、从性成熟期弹涂鱼雌鱼的肝脏组织中提取总RNA，进行反转录扩增；
S2、分别设计Vtg的简并引物进行扩增反应，获得VtgAa基因片段；
S3、以弹涂鱼总RNA为模板根据RACE法别制备VtgAa基因3’端和5’端cDNA序列；
S4、设计特异性全长引物，扩增获得VtgAa基因序列。
6.如权利要求5所述的克隆弹涂鱼VtgAa基因序列的方法，其特征在于，步骤S2中，VtgAa基因对应的简并引物为如SEQ ID NO.7所示的vtgAa-degenerate-F1和如SEQ IDNO.8所示的vtgAa-degenerate-R1。
7.如权利要求5所述的克隆弹涂鱼VtgAa基因序列的方法，其特征在于，步骤S3中，VtgAa基因对应的RACE引物为如SEQ ID NO.13所示的vtgAa-5'RACE-GSP1和如SEQ IDNO.14所示的vtgAa-3'RACE-GSP2。
8.如权利要求5所述的克隆弹涂鱼VtgAa基因序列的方法，其特征在于，步骤S4中，VtgAa基因对应的特异性全长引物为如SEQ ID NO.19所示的vtgAa-full primer-F1和如SEQ ID NO.20所示的vtgAa-full primer-R1。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海海洋大学;中国水产科学研究院东海水产研究所;宁海县三门湾现代渔业园区管委会;浙江省淡水水产研究所，未经上海海洋大学;中国水产科学研究院东海水产研究所;宁海县三门湾现代渔业园区管委会;浙江省淡水水产研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710163952.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
