[发明专利]一株6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL-3及其应用

说明书

一株6‑苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL‑3及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明杂交瘤细胞株ZXL‑3已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.13084。此细胞株分泌的单克隆抗体，对6‑苄氨基腺嘌呤具有较好的特异性和检测灵敏度，IC₅₀为2.5 ng/mL，可实现对水果、蔬菜中6‑苄氨基腺嘌呤残留量的检测，为食品中6‑苄氨基腺嘌呤残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL-3及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA）是一种人工合成的植物生长激素，主要作为促长剂和保鲜剂使用。它能够促进与调节植物生长发育以及蔬菜、水果的保鲜和储存。6-BA是第一个人工合成的细胞分裂素，主要成份是嘌呤类生物碱和一些无机物，在细胞分裂素中具有较高活性。6-BA作为植物促长剂和果蔬保鲜剂的主要成分，已在国内外进入应用阶段。作为植物促长剂使用，可以提高种子发芽率，促进幼苗生长，最终提高产率，常被用于促进豆芽的生长，提高烟叶的产量等。在作物生长过程中，6-BA能够起到将氨基酸生长素、无机盐等向植物的茎、根等部位输运的作用，改善其生长。另外6-BA还能够通过抑制植物内的叶绿素、核酸、蛋白质分解、抑制呼吸等方式对作物防衰保鲜，因此6-BA适用于各种绿叶蔬菜（如青椒、黄瓜、豆角等）贮藏前使用。

6-苄氨基腺嘌呤已被广泛应用于农业、果树栽培和园艺等领域。因此 6-BA 在市售水果和蔬菜中一般都有一定的残留，而人体摄入6-BA过多会刺激食道、胃黏膜，造成食道、胃黏膜损伤，出现恶心、呕吐等现象。国家标准 GB2760-1996 将6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）作为允许使用的食品添加剂，同时也规定了其最高允许使用限量（0.01 g/kg）和最高允许残留量（0.20 mg/kg）。然而，目前一方面国内外至今尚未建立6-苄氨基腺嘌呤进出口产品质量的检测标准及其测定方法，这给6-BA的生产使用和进出口贸易以及食品卫生监督与监测工作带来很大的阻碍；另一方面食品中6-BA残留量的检测方法也没有国家标准。为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对6-BA的高效、快速的检测方法，而酶联免疫法（ELISA）前处理简单，成本低，可实现大量样品的快速检测，且检测时对样本的纯度要求不高。因此，建立高效的免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对6-苄氨基腺嘌呤的高特异性单克隆抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一株6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL-3，由该细胞株制备的抗体对6-苄氨基腺嘌呤具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立6-苄氨基腺嘌呤的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL-3，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCCNo.13084。

6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No. 13084的6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL-3分泌产生。

所述6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中6-苄氨基腺嘌呤残留的分析检测。

本发明提供的6-苄氨基腺嘌呤单克隆抗体杂交瘤细胞株ZXL-3的制备基本步骤为：

（1）半抗原的衍生：

原药 Mol. Wt：225.249

半抗原：用6-氯嘌呤和4-（氨甲基）苯甲酸取代得到：