[发明专利]一种ASE‑HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法。

背景技术

紫珠(Callicarpanudiflorae)为马鞭草科小灌木植物，有止血、抗菌、收敛、解毒、镇痛、以及促进愈合的作用。其抗菌、抗病毒作用，尤其对金葡萄球菌、伤寒杆菌、肺炎双球菌等均有不同的抑制作用，其中对金葡萄球菌，伤寒杆菌抑菌作用最强。紫珠还可抑制毛细血管的通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反应作用，同时可明显缩短出、凝血时间，止血效果显著。紫珠的主要成分为黄酮甙、缩合鞣酸、中性树脂、酚类、多糖、羟基化合物及镁、钙、铁盐等，其中，紫珠萜酮、芹菜素、毛蕊花糖苷、木犀草素及其配糖体等黄酮类物质的含量约为5％。当以毛蕊花糖苷为指标探讨裸花紫珠浸膏的抗菌、抗炎和止血的药理效果时，实验结果表明，随着毛蕊花糖苷含量的升高，裸花紫珠浸膏的抑菌抗炎和止血作用都增强。

目前市场上紫珠制剂主要有颗粒剂、胶囊、片剂、分散片、合剂、软胶囊、栓剂等，上述制剂的质量标准仅部分制剂进行了总黄酮的含量测定，测定方法为紫外分光光度法，定量很不准确，没有关于紫珠制剂中毛蕊花糖苷的含量测定方法。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种能准确测定含量的ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC测定大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的大叶紫珠并制备供试品溶液；

步骤2：采用HPLC法检测大叶紫珠中的毛蕊花糖苷含量。

进一步的，所述的步骤1包括下述的子步骤：

步骤S1：将大叶紫珠粉碎，过四号筛，取过筛后的粉末0.25g，与1g硅藻土混合均匀；

步骤S2：将混合物加入到底部铺设有纤维滤膜的萃取池中，再加入硅藻土至达到萃取池池口，采用ASE法进行萃取；

步骤S3：收集萃取液，用甲醇定容至50ml，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。

进一步的，所述的步骤S2中，萃取参数为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度为120℃；静态萃取时间为10min；循环次数为3次；冲洗体积为100％；吹扫时间为100s。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱：Thermo AQ C18；流动相：乙腈-0.5％磷酸；流速：0.3mL/min；检测波长：332nm；柱温：35℃；进样量：1μl。

进一步的，所述的所述的色谱柱的规格为2.1mm×50mm，3μm。

进一步的，所述的流动相中的乙腈-0.5％磷酸的体积比为17:83。

本发明的有益效果如下：

能准确有效的测定大叶紫珠中毛蕊花糖苷的含量，误差小，可进一步提高大叶紫珠的质量标准，确保大叶紫珠的质量和临床效果。

附图说明

图1为毛蕊花糖苷对照品图谱；

图2为快速溶剂萃取样品图谱；

图3为药典方法样品图谱；

图4为毛蕊花糖苷以浓度(μg)-峰面积进行线性回归图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Agilent1290超高速液相色谱仪

1.2试剂(除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯)：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；

甲醇(CH₃OH)：色谱纯(液相色谱用)；

乙腈(CH₃CN))：色谱纯(液相色谱用)。

1.3样品：

大叶紫珠购于玉林药材市场，经广西梧州食品药品检验所副主任中药师黄蘅鉴别。

对照品毛蕊花糖苷由中国生物制品检定研究院提供，批号：111530-201512。

2方法

2.1对照品溶液的制备：

取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含毛蕊花糖苷50μg的溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备