[发明专利]一种PAEs降解菌的固定化微球及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)菌悬液的制备：将PAEs降解菌培养至对数生长期，用生理盐水将菌体洗净后，再用生理盐水将菌体调配成菌悬液，使菌悬液的OD₆₀₀＝0.8-1.2；所述PAEs降解菌为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)RXX-01，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2016年11月1日，保藏编号为CGMCC No.13224；所述生理盐水为灭菌的0.9％NaCl溶液；

(2)混合菌液的配备：用无菌水配制海藻酸钠溶液，将活性炭加入到海藻酸钠溶液中混匀得混合液，向混合液中加入步骤(1)的菌悬液混匀得混合菌液；各组份所占重量比分别为：菌悬液15-25％，海藻酸钠2-3％，活性炭2-4％；

(3)固定化微球的制备：用无菌水配制20-30g/L的氯化钙溶液，并将混合菌液逐滴滴入氯化钙溶液中，交联20-30h后制备得到固定化微球；混合菌液与氯化钙溶液的体积比为1:1.5～1:2。

2.根据权利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，混合菌液各组份所占重量比分别为：菌悬液20％，海藻酸钠3％，活性炭2％；用于制备固定化微球的氯化钙溶液的浓度为25g/L。

3.根据权利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中恶臭假单胞菌RXX-01的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，组份为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加水定容至1000mL。

4.根据权利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中恶臭假单胞菌RXX-01的培养条件为：25-30℃、pH6.5-7.5、150-200r/min恒温震荡培养24-72h。

5.根据权利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中清洗菌体的方法为：将恶臭假单胞菌RXX-01的培养液于3500-4500rpm离心5-15min，弃上清液，用灭菌的生理盐水重悬沉淀后，重复离心及重悬沉淀的步骤1-3次。

6.根据权利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中采用蠕动泵将混合菌液滴入氯化钙溶液中，流量控制在6mL/min。

7.根据权利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)制备好的固定化微球用无菌蒸馏水冲洗干净，4℃保存。

8.权利要求1-7任一所述方法制备得到的PAEs降解菌的固定化微球。

9.权利要求8所述PAEs降解菌的固定化微球在降解农田土壤邻苯二甲酸酯中的应用。

10.根据权利要求9所述的PAEs降解菌的固定化微球的应用，其特征在于，所述PAEs降解菌的固定化微球在降解农田土壤中邻苯二甲酸酯时的用量为0.1-1kg/kg干土。