[发明专利]培养基、培养基组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，更具体地涉及一种培养基、培养基组合物及其制备方法。

背景技术

培养基(culture medium)是人工配制的，适合微生物生长、分离鉴别的营养基础。一般基础培养基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化钠、琼脂等基本营养物质。在临床及食品卫生检验所用的培养基中，还经常需要添加抑菌剂、指示剂、血液、糖类等组分，以利于特定细菌的分离与鉴别，而病毒培养和疫苗生产中所用的培养基，则需要添加不同种类的氨基酸、核苷酸、无机盐、生长因子等物质。培养基组分的复杂性及添加物稳定性的不同，直接决定了培养基的配置工艺和添加流程，实际工作中需针对性控制。

培养基作为微生物研究的基础原料，在使用时应达到如下状态：

(1)完全无菌状态；

(2)培养基中各组分均衡有效，制备过程中培养基组分无损失及变性；

(3)制备时间短，以保证接种时待检样品中微生物的活性，尤其是临床样本和厌氧菌。

固体/半固体培养基是微生物研究过程中最常使用的一种培养基，其成分特征的共性是含有琼脂成分作为凝固时的结构支撑组分。琼脂凝胶的融点约为90～95℃，而凝固点为40～45℃，这一特性决定了琼脂能够作为微生物培养基的凝固剂，在较低温度下将培养基制备成所需形状。在一种叫做倾注培养的微生物培养方法中，需要先将含有微生物的样品与培养基进行混合，将微生物包埋于培养基内，琼脂的低温凝固特性不会对微生物产生伤害。

实验室中即配即用的方式并不利于久存，因此如今培养基市场供应的主要方式是出现于1917年的干粉式培养基，目前市售的干粉培养基已有400多个品种，由于各个品种的组分不同，配置过程复杂，各组分添加的流程不易掌握，在实际工作中容易产生失误而导致实验失败。

此外，目前主流的以干粉模式配制的固体、半固体培养基还有以下不足：

(1)配制周期长，工作量大。

以干粉培养基配制固体或半固体培养基的流程如下：

干粉称量→配制→调节pH值→高压灭菌→冷却至50～55℃→加入添加剂混匀待用。整个操作过程用时约两至三小时，操作繁琐，造成人力资源的浪费。

(2)干粉培养基的组分均衡度往往不够理想。

培养基的组分十分复杂，部分添加组分是微量的，以干粉形式供应过程中，常常因混合不均匀或运输过程中的分层现象导致生产出的成品培养基成分不够均衡。

以肠杆菌分离鉴别培养基中最为常用的沙门志贺氏菌琼脂(SS琼脂)为例，其组分如下：

试想将0.025克中性红组分及0.00033克煌绿组分均匀混合于60克其它物料当中，其难度可想而知。

(3)配制过程往往需要通过降低灭菌温度或减少灭菌时间来保护部分成分的稳定性和有效性，因而导致产品污染几率增加。

例如亚硫酸铋琼脂，由于亚硫酸铋高温下不稳定，无法采用高压灭菌处理，只能通过煮沸杀灭微生物繁殖体，而在煮沸的状态下，真菌孢子和细菌的芽孢是无法被杀灭的。

(4)由于琼脂的溶解温度约为90～95℃，培养基液化后的可使用温度通常为50℃，配制后需要的降温时间长。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种培养基、培养基组合物及其制备方法，以期解决上述技术问题中的至少之一。

为了实现上述技术目的，作为本发明的一个方面，本发明提供了一种培养基组合物，包括：

第一组分，为所述培养基组合物中的结构支撑组分，所述第一组分为凝胶或干粉；所述第一组分灭菌后单独封装，或单独分装后高温灭菌；

第二组分，为所述培养基组合物中除了第一组分、对常温、光照或溶液不稳定的组分、或完整的动物活细胞、或高温高压灭菌时会发生变性的组分之外的其余组分；所述第二组分灭菌后单独封装，或单独分装后高温高压灭菌。

作为本发明的另一个方面，本发明还提供了一种培养基组合物的制备方法，包括以下步骤：

将培养基中的结构支承组分制成干粉或加水配制成凝胶，灭菌后单独封装或单独分装后高温灭菌，得到所述培养基组合物的第一组分；

将所述培养基中除了第一组分，以及常温、光照或溶液状态下不稳定的组分、或完整的动物活细胞、或高温高压灭菌时会发生变性的组分之外的其余组分混合配制成干粉或浓缩液，灭菌后单独封装或单独分装后高温高压灭菌，得到所述培养基组合物的第二组分；

其中，上述两个步骤不分先后顺序，由此得到所述培养基组合物独立封装的两个组分。