[发明专利]一种具有抗肿瘤作用的毛菌素J及其制备方法与用途

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种具有抗肿瘤作用的毛菌素J及其制备方法与用途。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的主要的疾病之一，随着环境恶化加剧等因素的影响，全球恶性肿瘤患病人数抑制呈现增加趋势。2016年CA Cancer J Clin发表的统计数据表明，基于2009-2011年间72个地方人群的癌症登记处数据，中国2015年将会有4292000例癌症新发病例，2814000例癌症死亡。癌症的预防与治疗将是一项非常艰巨的任务。

天然产物一直是药物的重要来源，目前临床使用的药物大多数来源于天然产物结构的改造与优化，部分药物直接来源于天然产物。据统计，从1981年到2010年的三十年之间，直接或间接来源于天然产物的药物平均占到每年上市药物的30-40％之间；2010年，天然产物相关来源的药物比例达到了空前的50％。

植物内生真菌次生代谢产物种类丰富，具有结构新颖、生物活性显著的特点，越来越多具有显著活性的次生代谢产物被从中发现，使得植物内生真菌成为了新颖活性药用化合物的重要来源之一。因此，从内生真菌次生代谢产物中寻找新颖的化合物成为抗肿瘤活性先导化合物发现的重要途径。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的目的就是要提供一种具有抗肿瘤作用的毛菌素J及其制备方法与用途。本发明制备的毛菌素J对5株人源肿瘤细胞(白血病HL-60、肺癌A-549、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MCF-7、结肠癌SW480)的增殖有显著的抑制作用，效果优于阳性对照药物顺铂，具有预期发展成为抗肿瘤药物的潜力。

为实现上述目的，本发明所提供的一种具有抗肿瘤作用的毛菌素J，该毛菌素J的结构式如下式(I)所示。

本发明还提供了一种制备所述具有抗肿瘤作用的毛菌素J的方法，包括如下步骤：将Chaetomium sp.YX-1菌种(其中，Chaetomium sp.YX-1菌种于2017年1月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国武汉大学，其微生物保藏编号为：CCTCC NO：M 2017028)培养处理后接种到液体培养基中发酵处理，取发酵液依次过滤、菌丝提取、滤液萃取处理，合并菌丝提取物和滤液萃取物得总提取物，取总提取物经硅胶柱层析利用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱，对洗脱后含有多硫代二酮哌嗪类化合物特征吸收峰部分在LC-MS分析追踪下经ODS柱层析以及Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，对含有多硫代二酮哌嗪类化合物特征峰部分，经过半制备液相纯化得到结构式为I的化合物毛菌素J。

进一步地，所述液体培养基按质量百分数计包括酵母提取物0.2-0.5％、蛋白胨0.2-0.5％、葡萄糖0.6-1％，余量为水。

进一步地，所述培养处理具体为将Chaetomium sp.YX-1菌种接种于PDA培养基上3-7天后，切成0.5cm×0.5cm的碎片；所述发酵处理的温度为22-32℃，发酵时间为15-45天。

进一步地，所述提取处理为采用质量百分数为90％的甲醇对发酵液过滤后的菌丝回流提取1-3次，得到菌丝提取物；所述滤液萃取处理为采用与发酵液过滤后的滤液等体积的乙酸乙酯萃取1-5次后，经减压回收乙酸乙酯溶剂后得到滤液萃取物。

进一步地，所述硅胶柱层析利用二氯甲烷/甲醇(CHCl₂/MeOH)进行洗脱，洗脱比例为50:1、30:1、15:1、8:1、4:1、2:1和1:1。

进一步地，所述ODS柱层析利用石油醚/乙酸乙酯(PE-EtOAc)进行洗脱，洗脱比例为50:1、30:1、15:1、8:1、4:1、2:1和1:1。

进一步地，所述Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离利用体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇(CHCl₂/MeOH)进行等度洗脱。

进一步地，所述半制备液相纯化采用的流动相为质量比为75:25的甲醇和水，液相流速为2.0mL/min。

进一步地，所述具有抗肿瘤作用的毛菌素J的方法，具体包括如下步骤：

1)将Chaetomium sp.YX-1菌种接种于PDA培养基上3-7天后切成0.5cm×0.5cm的碎片，再接种到液体培养基中，在温度为22-32℃的条件下发酵15-45天，取得发酵液；