[发明专利]用于高产细菌素的植物乳杆菌SWUN5815及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体地说，涉及一种用于高产细菌素的植物乳杆菌SWUN5815及其应用。

背景技术

乳酸菌是人和动物肠道内的优势微生物菌群，益生性的乳酸菌在机体内有调节人和动物体微生态平衡，抑制并杀死致病菌，增强机体免疫力的作用。

植物乳杆菌是一种在泡菜、酸奶及动物胃肠道中等发现的能广泛利用植物性碳源、耐受胆盐和低的乳酸杆菌。有些植物乳杆菌能产生类细菌素，对大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌等肠道致病菌有抑制作用。植物乳杆菌产生的类细菌素由天然氨基酸组成，转录后不修饰，是热稳定的疏水肽，该类细菌素的合成受群体感应系统调节控制。

常见的牦牛腹泻肠道病原菌如大肠杆菌、沙门氏菌、空肠弯曲杆菌、奇异变形杆菌等，由于抗生素的不合理使用导致牦牛腹泻问题难以控制。乳酸菌细菌素因其安全、无毒且有较强的抑菌活性，目前为止被普遍认为是抗生素最有效的替代物。而且有高效抗菌活性，能被机体降解，不产生耐药性等优点而受到人们的关注。牦牛源产细菌素乳酸菌不仅对高原环境以及牦牛肠道环境有更强的适应力，抑制牦牛肠道病原菌减轻牦牛腹泻问题，还可以促进牦牛生长发育、调节机体免、促进肠道发育和局部抵抗力，在食品安全方面也具有十分重要的意义。

现有技术中大部分乳酸菌产细菌素的抑菌谱窄，只能单独抑制革兰氏阳性菌或者革兰氏阴性菌；由于种属特异性，大部分乳酸菌不能适应青藏高原严峻的地理环境，不能适用于牦牛。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种用于高产细菌素的植物乳杆菌SWUN5815及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种用于高产细菌素的植物乳杆菌SWUN5815，该菌株已于2016年08月02日保藏于保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO:M2016419。

进一步地，所述植物乳杆菌的形态学特征具体为：

菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细胞杆状，菌体约0.5-1.0μm宽，1.5-4μm长，成单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形；

菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0.5-2.0mm之间，圆形，边缘整齐，乳白色，透明，表面湿润光滑，不产生色素。

进一步地，植物乳杆菌体内耐受特征为：

植物乳杆菌的菌株耐酸性较强，在pH3.0的人工胃液下3h后存活率为92.46±4.06％；在1.0％浓度胆盐下可以缓慢生长，生长效率达到无胆盐培养的17.36±1.19％。

本发明还公开了一种植物乳杆菌SWUN5815在制备植物乳杆菌细菌素中的应用。

进一步地，将上述的植物乳杆菌SWUN5815接种于MRS培养基中培养，得到植物乳杆菌菌发酵液。

进一步地，制备植物乳杆菌细菌素的方法具体为：

1)把菌株SWUN5815保存液接种到5mL的MRS液体培养基中，震荡混匀，37℃恒温培养24h，以2％的接种量连续活化三代，取第三代的发酵液以4000×g离心10min，取上清，上清液经0.22μm微膜过滤，-20℃冰箱保存备用，制备得到粗植物乳杆菌MRS发酵上清液；

2)收集后指数生长期的植物乳杆菌MRS发酵上清液500mL，4℃，12000×g离心20min收集上清液，以0.22μm的滤膜过滤上清液以除去残余的细胞碎片；加入预冷的三氯乙酸/丙酮溶液至三氯乙酸的终浓度为12.5％，-20℃静置8h使蛋白充分沉淀，4℃，15000×g离心20min收集蛋白沉淀，向沉淀中加入80％的预冷丙酮反复洗涤3-5次以除去残留的三氯乙酸，室温放置4-5min使丙酮完全挥发，加入100μL超纯水溶解蛋白沉淀，制备得到纯化后的植物乳杆菌MRS发酵上清液，即为植物乳杆菌细菌素。

进一步地，MRS培养基成分如下：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5g、葡萄糖20.0g、吐温801.1g、磷酸氢二钾2.0g、乙酸钠3.0g、柠檬酸二胺2.0g、硫酸镁0.6g、硫酸锰0.25g以及蒸馏水1000mL。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)本发明植物乳杆菌能够同时抑制革兰氏阳性菌和阴性菌；

2)本发明植物乳杆菌含有多种细菌素基因，包括plnA、plnB、plnD、plnEF、plnJ、plnK、plnI、plnL和plnN；

3)本发明植物乳杆菌适应青藏高原的严峻环境与牦牛体内的内环境。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。