[发明专利]基质金属蛋白酶‑3测定试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可采用胶乳增强免疫比浊法测定人血清中基质金属蛋白酶-3含量的基质金属蛋白酶-3测定试剂及其制备方法。

背景技术

MMP-3是基质金属蛋白酶超家族的成员之一。基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca²⁺、Zn²⁺等金属离子作为辅助因子而得名。其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成:(1)疏水信号肽序列；(2)前肽区，主要作用是保持酶原的稳定，当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活；(3)催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要；(4)富含脯氨酸的铰链区；(5)羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中催化活性区和前肽区具有高度保守性。

MMP-3是一类能够降解细胞外基质的蛋白酶，存在于正常人体，参与软骨基质的降解，骨吸收，于细胞外基其中，金属蛋白酶3不仅可以直接降解Ⅱ，IX，XI型胶原，还可以调节其他的MMPs活性。

MMP-3能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型胶原及明胶，其活性受到三个水平的调节，即基因转录水平，无活性酶前体经蛋白水解作用而激活以及特异性抑制因子(TIMP)的作用。

MMP-3可以将基质分子核心蛋白聚糖剪切，然后释放具有生物学活性的转化生长因子－β(TGF－β)，TGF－β不仅调控细胞的增值，且对血管生成也有作用。因此MMP-3与乳腺癌的发生、发展关系密切，而且在乳腺癌的浸润、转移过程中起重要作用。MMP-3能够降解聚集的软骨连结蛋白纤维结合素、核心蛋白及Ⅳ、Ⅶ、Ⅸ型的胶原的显著活性，能导致软骨的降解。强直性脊柱炎患者血清MMP-3水平显著高于正常人群，能有效反映出患者的疾病活动及骨关节破坏程度，能为临床判断as病情进展及疗效提供科学依据。

MMP-3是一种相对稳定的蛋白质，在-20℃下标本可以长期保存。目前有层析定性和酶免定量的检测方法可用，层析定性仅能在样本浓度超过检测限后简单确定有无，无法准确定量，不能反映病情的轻重程度及对病情进行及早的发现和治疗，而且存在较大的假阴或假阳，酶免方法主要是被科学研究者应用于科研，由于各自进行检测试剂的制备，没有统一的配方及工艺，没有对检测条件深入研究，导致不同批次试剂检测结果差异较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基质金属蛋白酶-3测定试剂及其制备方法。

为实现上述发明目的之一，本发明采用如下技术方案：

一种基质金属蛋白酶-3测定试剂，包括预处理试剂、抗体胶乳试剂、校准试剂；

所述预处理试剂包括缓冲剂、防腐剂、增敏剂、无机盐、表面活性剂，所述预处理试剂的PH值为7.2-7.6；

所述抗体胶乳试剂包括缓冲剂、结合有抗人基质金属蛋白酶-3抗体的胶乳微球、防腐剂、保护剂，所述胶乳微球直径为100-400nm；

所述校准试剂包括定量的基质金属蛋白酶-3抗原。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述预处理试剂中的无机盐包括氯化钠、氯化钾，缓冲剂为磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸中的一种，增敏剂为聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、氟化钠中的一种。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述抗体胶乳试剂中与胶乳微球结合的抗人基质金属蛋白酶-3抗体为鼠抗人基质金属蛋白酶-3单克隆抗体、羊抗人基质金属蛋白酶-3单克隆抗体、兔抗人基质金属蛋白酶-3单克隆抗体中至少一种，或者是鼠抗人基质金属蛋白酶-3多克隆抗体、羊抗人基质金属蛋白酶-3多克隆抗体、兔抗人基质金属蛋白酶-3多克隆抗体中至少一种。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述抗体胶乳试剂中的保护剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、季铵盐、还原型谷胱甘肽中的一种或多种。

为实现上述另一发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种基质金属蛋白酶-3测定试剂的制备方法，分别制备预处理试剂、抗体胶乳试剂、校准试剂；

所述预处理试剂的制备方法包括以下步骤：将缓冲剂、防腐剂、增敏剂、无机盐、表面活性剂与水混合调配为PH值为7.2-7.6的溶液即得；

所述抗体胶乳试剂的制备方法依次包括以下步骤：

S1、将直径为100-400nm的胶乳微球在含碳化二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺的缓冲溶液中活化，缓冲液pH值为6.1；