[发明专利]一种含阿司匹林的甘草生根培养基筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于甘草组织培养技术领域，尤其涉及一种含阿司匹林的甘草生根培养基筛选方法。

背景技术

甘草，（学名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用，然而目前的培养基筛选方法都是以科研为目的的筛选方法，不能商业工厂化生产的需求。

稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（Rare Earth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。

镧是一种金属元素，原子序数57，原子量138.9055，元素名来源于希腊文，原意是“隐蔽”。银灰色光泽，质地较软，密度6.174g/cm3，熔点921℃，沸点3457℃；化学性质活泼，暴露于空气中很快失去金属光泽生成一层蓝色的氧化膜，但是它并不能保护金属，继而进一步氧化生成白色的氧化物粉末。能和冷水缓慢作用，易溶于酸，可以多种非金属反应。金属镧一般保存于矿物油或稀有气体中。镧在地壳中的含量为0.00183%，在稀土元素中含量仅次于铈。

发明内容

基于现有技术中甘草的组培生根培养基的筛选方法中偏向于科研，不适合商业工厂化生产的问题，本发明提供一种含阿司匹林的甘草生根培养基筛选方法，其通过单一变量法对甘草丛生芽进行生根培养，分析统计出根率、出根数、根重量和整棵植株的重量，在评价当中结合出根率、根质量和整棵植株的重量，更加符合商业工厂化的生产的标准。

一种含阿司匹林的甘草生根培养基筛选方法，其包括以下步骤：

步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培生根过程中添加稀土元素和生根剂的量并确定稀土元素和阿司匹林初步筛选范围；

步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的增殖丛生芽，将增殖丛生芽分开成单芽；

步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素和阿司匹林添加量的培养基，分别接种相同量的生根芽，并进行常规出根组织培养；

步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素和阿司匹林浓度梯度中出根的存活生根芽的数量，并计算有效出根率；

步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的芽取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分后对整株植株进行称重，再将根部切出，并对根部进行称重，记录重量；

步骤S60计算评估因数，将有效出根率乘以根重量的十分七和植株整体重量的十分之四的和，得出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素和阿司匹林浓度梯度；

步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；

步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。

优选地，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置5-15个浓度梯度。

优选地，所述的步骤S30中接种的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10-20组平行实验组。

优选地，所述的稀土元素是镧元素。

优选地，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。