[发明专利]一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于甘草组织培养技术领域，尤其涉及一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法。

背景技术

甘草，（学名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用，然而现有的甘草培养中极少有通过增强光源调节甘草生长的技术。

绿色植物是一部以光为动力的机器，许多生理生化过程受光的调节控制，形态构建受光作用的诱导。不同光质对植物的光形态建成、生理生化过程的调节已有报道。在日光灯光照条件下，辅助不同光质的光照，对甘草组培诱导生长进行调整，提高甘草组织培养的生产效率。

铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。

发明内容

基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法，通过使用单一变量法调整测试增强光源的波长对甘草组织培养苗的生理影响，确定最适增强光源波长，并根据不同波长光源对甘草组培苗的影响，确定不同波长光源组合，并通过保持增强光源不变反向确定基础培养基，同时引入组培苗的生长量作为筛选标准，更加适合商业工厂化生产。

一种甘草子叶诱导培养光源条件筛选方法，其包括以下步骤：

步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加增强光源种类并确定光源波长的初步筛选范围；

步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草子叶作为外植体，对外植体进行同一的消毒灭菌处理；

步骤S30对照培养，以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草子叶，并进行常规诱导组织培养作为对照组，在常规培养的基础上条件不同波段增强增强光源作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；

步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个实验组和对照组的诱导出愈伤组织的数量和褐化的数量，并计算诱导率和褐化率；

步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；

步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的增强光源波长；

步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的增强光源波长范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适波长范围；

步骤S80方向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适波长范围搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基；

步骤S90不同波长组合筛选，通过单一因数确定不同波长对甘草子叶诱导的生理参数影响，调整最适合波长组合。

优选地，所述的步骤S30中每个实验组或者对照组设置5-15个平行组。

优选地，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。