[发明专利]一种添加香豆素的香蕉壮苗培养基筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于香蕉组织培养技术领域，尤其涉及一种添加香豆素的香蕉壮苗培养基筛选方法。

背景技术

香蕉（学名：Musa nana Lour.）芭蕉科芭蕉属植物，又指其果实。热带地区广泛栽培食用。香蕉味香、富含营养，终年可收获，在温带地区也很受重视。植株为大型草本，从根状茎发出，由叶鞘下部形成高3～6公尺(10～20尺)的假杆；叶长圆形至椭圆形，有的长达3～3.5公尺(10～11.5尺)，宽65公分(26寸)，10～20枚簇生茎顶。穗状花序下垂^[1]，由假杆顶端抽出，花多数，淡黄色；果序弯垂，结果10～20串，约50～150个。植株结果后枯死，由根状茎长出的吸根继续繁殖，每一根株可活多年。原产亚洲东南部：台湾、海南、广东、广西等地区均有栽培。目前香蕉是一种广受欢迎的水果，也是部分地区的主要粮食，拥有极大市场需求量，对香蕉进行快速繁殖的研究具有一定的必要性，不仅能解决庞大的市场需求量，也能在一定程度上保存优良的香蕉品种，组织培养是香蕉快速繁殖的方法之一，选择合适的培养基是提高组织培养效率途径之一，然而目前的培养基筛选方法都是以科研为目的的筛选方法，不能商业工厂化生产的需求。

稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（Rare Earth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。

镧是一种金属元素，原子序数57，原子量138.9055，元素名来源于希腊文，原意是“隐蔽”。银灰色光泽，质地较软，密度6.174g/cm3，熔点921℃，沸点3457℃；化学性质活泼，暴露于空气中很快失去金属光泽生成一层蓝色的氧化膜，但是它并不能保护金属，继而进一步氧化生成白色的氧化物粉末。能和冷水缓慢作用，易溶于酸，可以多种非金属反应。金属镧一般保存于矿物油或稀有气体中。镧在地壳中的含量为0.00183%，在稀土元素中含量仅次于铈。

发明内容

基于现有技术中香蕉的组培壮苗培养基的筛选方法中偏向于科研，不适合商业工厂化生产的问题，本发明提供一种添加香豆素的香蕉壮苗培养基筛选方法，其通过单一变量法对香蕉组培苗进行壮苗培养，分析统计叶片叶绿素含量和植株平均含量，在评价当中结合叶片叶绿素含量和植株平均含量，更加符合商业工厂化的生产的标准。

一种添加香豆素的香蕉壮苗培养基筛选方法，其包括以下步骤：

步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培壮苗过程中添加稀土元素和香豆素的量并确定稀土元素和香豆素初步筛选范围；

步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的香蕉组培幼苗；

步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素和香豆素添加量的培养基，分别接种相同量的香蕉组培幼苗，并进行常规壮苗组织培养；

步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素和香豆素浓度梯度中幼苗的叶片叶绿素含量；

步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的香蕉组培苗取出，用清水冲洗干净，对同一试验组的平行样本分别进行称重，计算出植株平均重量；

步骤S60计算评估因数，将叶绿素含量数值加上植株平均重量数值的十分之一得出评估因数，对比不同实验组的评估因数，选出评估因数最大的实验组，确定最适稀土元素和香豆素的浓度；

步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；

步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。

其中，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置5-15个浓度梯度。

其中，所述的步骤S30中接种的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10-20组平行实验组。

其中，所述的稀土元素是镧元素。

其中，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。