[发明专利]一株减毒高产鼠李糖脂的工程菌株及其构建与应用在审
| 申请号： | 201710172680.9 | 申请日： | 2017-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN106754609A | 公开（公告）日： | 2017-05-31 |
| 发明（设计）人： | 张友明;尹佳;符军;姜婵娟 | 申请（专利权）人： | 山东大学苏州研究院;山东大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/78;C12P19/44;C12R1/385 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株减毒 高产 糖脂 工程 菌株 及其 构建 应用 | ||
1.一种减毒高产鼠李糖脂的重组绿脓杆菌工程菌，其特征在于：所述工程菌是其基因组中已敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)且含有过表达质粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的铜绿假单胞菌(Pseudomas aeruginosa)，命名为PAO1aroA；其中，所述过表达质粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述减毒高产鼠李糖脂的重组绿脓杆菌工程菌的构建方法，步骤是：
利用假单胞菌噬菌体的重组酶构建的同源重组系统，将一段50bp-100bp的携带短同源臂的抗性基因DNA片段整合到铜绿假单胞菌(Pseudomas aeruginosa)的染色体上，实现敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)，获得减毒铜绿假单胞菌，再构建包含鼠李糖脂合成的转运酯酶基因EstA和鼠李糖基转移酶复合物基因RhlAB，庆大霉素抗性基因，接合转移起始位点oriT和一个广谱型复制子pBBRI的过表达质粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta，并将该过表达质粒转入获得的减毒铜绿假单胞菌中，即得到通过多拷贝质粒增加该菌鼠李糖脂合成相关基因的拷贝数实现的减毒高产鼠李糖脂的重组绿脓杆菌工程菌。
3.一种用于构建减毒高产鼠李糖脂的重组绿脓杆菌工程菌的重组酶表达质粒，其特征在于：所述质粒是过表达质粒pBBRI-rha-redgam-BAS-kan，该质粒包含鼠李糖脂合成的转运酯酶基因EstA和鼠李糖基转移酶复合物基因RhlAB，庆大霉素抗性基因，接合转移起始位点oriT和一个广谱型复制子pBBRI，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述质粒不需要抗生素的选择压力，能在构建的减毒的铜绿假单胞菌中稳定复制。
4.权利要求1所述减毒高产鼠李糖脂的重组绿脓杆菌工程菌在工业化生产鼠李糖脂中的应用。
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