[发明专利]与豌豆抗白粉病等位基因er1‑9共分离的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物病理学、遗传育种及分子生物学检测技术领域，具体地说，涉及一种与豌豆抗白粉病等位基因er1-9共分离的分子标记及其应用。

背景技术

由豌豆白粉菌(Erysiphe pisi D.C.)引起的豌豆白粉病是世界性豌豆病害(Nisar et al.,2011；Fondevilla et al.,2012)。防治豌豆白粉病最为经济、有效且环境安全的方法是种植抗病品种。目前，国外已经鉴定了大量的抗白粉病豌豆资源，并在抗性资源中鉴定了3个独立遗传的抗白粉病基因(er1，er2，Er3)(Harland et al.,1948；Heringa et al.,1969)，而大量抗性资源筛选和遗传分析结果表明，许多不同地理起源的抗白粉病豌豆资源的抗性均由er1基因控制(Tiwari et al.,1997；Ghafoor et al.,2012；Liu et al.,2003；Vaid et al.,1997)。er1基因具有广谱、持久抗性，已在欧洲、北美洲及澳大利亚的豌豆育种中广泛应用(Fondevilla et al.,2007)。抗病基因er1和er2分别被定位在豌豆遗传图谱的第6连锁群(LG VI)(Timmerman et al.,1994)和第3连锁群(LG Ⅲ)(Katoch et al.,2010)。

最近研究发现，豌豆抗白粉病基因er1是由感病基因PsMLO1功能丧失而产生的(Humphry et al.，2011；Pavan et al.,2011)。在自然和诱变条件下，豌豆感白粉病基因PsMLO1的序列发生碱基缺失、插入、替换等导致不同的er1等位基因产生，目前已经鉴定了7个er1等位基因即er1-1、er1-2、er1-3、er1-4、er1-5、er1-6和er1-7(Humphry et al.,2011；Pavan et al.,2011；Sun et al.,2016a；Sun et al.,2016b)。除了er1-2是由大片段的插入和缺失产生的，其他6个等位基因都是由单碱基或小片段的插入、缺失或替换产生的。随着分子标记技术在分子辅助育种中的广泛应用，基于不同的分子标记技术，开发了已鉴定的er1的7个等位基因的功能标记(Pavanet al.,2013；Sun et al.,2016a；Sun et al.,2016b)，其中功能标记er1-6和er1-7的有效性已被验证。近年来，KASP(Kompetitive allele specific PCR)即竞争性等位基因特异性PCR技术，是近几年兴起的一种新的SNP分型方法，具有准确性高、灵活性强和成本低等特点，已经在多种植物上被广泛应用于高通量的SNP分型以及InDels检测(Semagn et al.,2014)。

最近研究人员在豌豆资源中筛选出了一些白粉病免疫资源(王仲怡等，2012)。通过PsMLO1同源序列分析在豌豆资源G0004400中鉴定了一个新等位基因er1-9，该基因在PsMLO1cDNA序列开放阅读框第928碱基处发生突变，T碱基缺失，这一碱基缺失突变导致第310个氨基酸由丝氨酸(S)变为亮氨酸(L)，从而引起PsMLO1蛋白功能的变化。为了通过分子辅助选择快速、高效的将er1-9应用于育种中，，开发与er1-9共分离的功能性分子标记成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种与豌豆抗白粉病等位基因er1-9共分离的分子标记及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种与豌豆抗白粉病等位基因er1-9共分离的分子标记，所述分子标记位于豌豆遗传图谱第VI连锁群上，与er1-9的遗传距离为0cM，用于扩增所述分子标记的3条特异性引物具有如下核苷酸序列：

正向引物序列1：TGTTATATGGGCAGGGTGGTATC

正向引物序列2：TTTTGTTATATGGGCAGGGTGGTATT

通用反向引物序列：CAAAATGTAGATTATGCTTACAATTAGTGGA。

本发明提供了上述分子标记在豌豆抗白粉病的分子标记辅助选择育种中的应用。

本发明提供了用于扩增与豌豆抗白粉病等位基因er1-9共分离的分子标记的引物组合，其含有：

正向引物序列1：TGTTATATGGGCAGGGTGGTATC

正向引物序列2：TTTTGTTATATGGGCAGGGTGGTATT

通用反向引物序列：CAAAATGTAGATTATGCTTACAATTAGTGGA。