[发明专利]用于检测FOXL2基因编码区的PCR引物及反应体系在审
申请号: | 201710176061.7 | 申请日: | 2017-03-22 |
公开(公告)号: | CN106801106A | 公开(公告)日: | 2017-06-06 |
发明(设计)人: | 周璐 | 申请(专利权)人: | 中国医学科学院整形外科医院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371 | 代理人: | 刘书芝 |
地址: | 100144*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 检测 foxl2 基因 编码 pcr 引物 反应 体系 | ||
1.用于检测FOXL2基因编码区的PCR引物,其特征在于,所述引物包括用于检测数目可变串联重复序列的VNTR引物,用于检测FOXL2基因编码区全长的扩增引物,用于检测FOXL2基因编码区分段长度的扩增引物。
2.根据权利要求1所述的PCR引物,其特征在于,所述用于检测数目可变串联重复序列的VNTR引物包括:
FOXL2-F4:5'-TGCTTCATCAAGGTGCCG-3'(SEQ ID NO 1);
FOXL2-R4:5'-GCACAAGCGAACTGCAGG-3'(SEQ ID NO 2)。
3.根据权利要求1所述的PCR引物,其特征在于,所述用于检测FOXL2基因编码区全长的扩增引物包括:
FOXL2-F3:5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 3);
FOXL2-R3:5'-GAGGGTGTGAGGTCAGGCT-3'(SEQ ID NO 4);
所述用于检测FOXL2基因编码区分段长度的扩增引物包括:
FOXL2-1F 5'-CGCAGTCTCCAGAAGTTTGA-3'(SEQ ID NO 5);
FOXL2-1R 5'-GCAGGAGGCATAGGGCAT-3'(SEQ ID NO 6);
或
FOXL2-2F 5'-CATGAAGAGGCCCTTCCG-3'(SEQ ID NO 7);
FOXL2-2R 5'-GCCCAGAGGGTGTGAGGT-3'(SEQ ID NO 8)。
4.检测FOXL2基因编码区的PCR体系,其特征在于,所述体系包括用于检测数目可变串联重复序列的PCR体系,用于检测FOXL2基因编码区全长的PCR体系,用于检测FOXL2基因编码区分段长度的PCR体系。
5.根据权利要求4所述的PCR体系,其特征在于,所述用于检测数目可变串联重复序列的PCR体系以15μL计为:
10×Buffer I,1.5μL;2.5mM dNTP,1.2μL;5μM荧光引物,0.8μL;TAKARA HS Taq酶,0.1μL;DNA,1.2μL;ddH2O,9.2μL,总反应体系为15μL。
6.根据权利要求4所述的PCR体系,其特征在于,用于检测FOXL2基因编码区全长的PCR体系以20μL计为:
10×Buffer I,2μL;2.5mM dNTP,1.6μL;5μM引物FOXL2-F3,0.6μL;5μM引物FOXL2-R3,0.6μL;Taq Hot Start酶(5U/μL),0.2μL;DNA,2.0μL;ddH2O,补齐至20μL;总反应体系为20μL。
7.根据权利要求4所述的PCR体系,其特征在于,用于检测FOXL2基因编码区分段长度的PCR体系以50μL计为:
DNA模板,1μL;引物FOXL2-1F,1μL;引物FOXL2-1R,1μL;10mM dNTP,1μL;Taq Buffer,5μL;25mM MgCl2,5μL;Taq酶(5U/μL),0.5μL;水,35.5μL;
或
DNA模板,1μL;引物FOXL2-2F,1μL;引物FOXL2-2R,1μL;10mM dNTP,1μL;Taq Buffer,5μL;25mM MgCl2,5μL;Taq酶(5U/μL),0.5μL;水,35.5μL。
8.根据权利要求5所述的检测数目可变串联重复序列的PCR体系,其特征在于,PCR反应条件为:
95℃,5min,1个循环;95℃,30s,60℃,30s,72℃,30s,40个循环;最后72℃延伸12min,1个循环,16℃保存。
9.根据权利要求6所述的检测FOXL2基因编码区全长的PCR体系,其特征在于,PCR反应条件为:
95℃,5min,1个循环;95℃,30s,60℃,30s,72℃,30s,40个循环;最后72℃延伸12min,1个循环,16℃保存。
10.根据权利要求7所述的检测FOXL2基因编码区分段长度的PCR体系,其特征在于,PCR反应条件为:
95℃预变性5min;94℃变性30s;55-60℃退火35s;72℃延伸40-50s;72℃修复延伸5-8min;35个循环。
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