[发明专利]一种siRNA及其应用

说明书

本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，具体涉及一种siRNA及其应用。所述siRNA为双链，其抑制鸡BCL11B基因表达，其序列为：正义链5'GGGACAGUCAAUGGAAGAA 3’，反义链5’UUCUUCCAUUGACUGUCCC 3’。利用本发明提供的siRNA干扰鸡BCL11B基因，转录水平上的干扰效率能达到91％，干扰效率极高、特异性好、灵敏度高、操作简便、实验周期短、价格低廉。本发明的siRNA为研究BCL11B基因在马立克氏病以及其他禽病中的作用机制提供直接有效的实验工具。本发明siRNA可用于制备预防或治疗鸡T细胞恶性淋巴瘤药物及制备治疗鸡马立克氏病药物。

技术领域

本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，具体涉及一种siRNA及其应用。

背景技术

马立克氏病(Marek’s disease)是一种由疱疹病毒科高度细胞接触性马立克病毒(MDV)引起的肿瘤性疾病，该病能够引起免疫抑制和T细胞恶性淋巴瘤。马立克氏病与禽流感、传染性法氏囊和新城疫都是危害家禽产业发展的主要疫病。目前防治该病主要通过疫苗的方法，但是随着疫苗的广泛使用，MDV呈现毒力逐渐增强的趋势，所以寻找其他防治该病的方法，深入研究马立克氏病发病机制显得尤为重要。关于马立克氏病抗性、易感基因的研究越来越多，其中报道较多的是MHC(Bacon,et al.,2001；Lian,et al.,2010；Niikura,et al.,2007)、生长素基因、GZMA(Sarson,et al.,2008)和IRG1(Smith,et al.,2011)等基因。

人BCL11B基因能够促进T细胞的激活和增殖，促进Th细胞的分化。曾有报道在CD4⁺T淋巴细胞中，BCL11B能够控制白介素-2(IL-2)的产生，利用siRNA干扰BCL11B之后，IL-2的产生明显降低，在一定程度上影响细胞炎症反应(Cismasiu,et al.,2006)，抑制BCL11B的表达能够引起肿瘤T细胞凋亡，而对正常成熟T细胞不会产生影响(Grabarczyk,et al.,2007)。

对于基因功能验证的研究，常用的方法主要有过表达、RNA干扰和以ZFNs、TALEN和CRISPR/Cas9为主的基因敲除等。过表达由于不能充分反映基因产物的真实表达情况，在实验中使用日渐减少。以ZFNs、TALEN和CRISPR/Cas9为主的基因敲除虽然效果最为显著，但是方法系统的建立需要较长的周期，而长的载体在转染细胞，尤其是原代细胞时存在困难，技术水平要求较高。现如今普遍使用的方法就是RNA干扰(RNAi)，该技术主要是利用20-25nt短的siRNA序列与基因的某段序列能够完全互补配对，激活RNA干扰通路，从而抑制基因的表达。

BCL11B基因在鸡上尚未有报道，其在马立克氏病肿瘤转化过程中的作用机制也没有相关研究报道

发明内容

本发明的目的是提出一种siRNA及其应用，具体技术方案如下：

一种siRNA为双链，其抑制鸡BCL11B基因表达，所述siRNA序列为：

正义链5'GGGACAGUCAAUGGAAGAA 3’

反义链5’UUCUUCCAUUGACUGUCCC 3’。

所述的siRNA在鸡马立克氏病作用机制研究中的应用。

所述的siRNA在制备预防或治疗鸡T细胞恶性淋巴瘤药物中的应用。

所述的siRNA在制备治疗鸡马立克氏病药物中的应用。

本发明的有益效果为：