[发明专利]一种马钱子总碱的提取及纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种马钱子总碱的提取及纯化方法，属于药物的技术领域。

背景技术

马钱子为马钱科植物马钱（Strychnos nux-vomica L.）或云南马钱（Strychnos pierriana A.W.Hill）的干燥成熟种子，主要活性成分为生物碱类，含量为生药的1.5%~5%，其中士的宁和马钱子碱约占总碱量的80%。在我国马钱子作为药用具有悠久的历史，其性苦味温，归肝脾经，具有通络止痛、散结消肿的功效，可用于风湿顽痹、跌打损伤、小儿麻痹后遗症、类风湿性关节炎、各种神经系统疾病、癌症、慢性支气管炎和慢性再生障碍性贫血等方面的治疗。但马钱子活性成分作为一个中成药用于临床治疗上述各类病症的数据还很少，主要是因为从中药马钱子分离出各活性成分很困难，所得的提取物组成复杂，难以就马钱子活性成分定性定量研究以便进行临床观察。因此，利用现代分离技术把生物碱从天然产物中分离出来并对其进行纯化，开发其药用价值，提高天然产物的经济和社会效益均具有非常重要的意义。

目前关于生物碱的提取方法主要有回流法、微波法、超声法、超临界提取法等，其中回流提取法出膏量最大，单位质量药材中提取的生物总碱量也最多。回流提取法可采用的提取溶剂一般有水、乙醇、酸性乙醇、50%乙醇、酸水、氨性氯仿等，实验研究表明，采用酸水提取法得到的提取物总量以及马钱子碱和士的宁碱单体量均高于其他溶剂。因而研究酸水回流提取马钱子总碱的工艺条件及其优化很有必要。

前期文献调研发现，马钱子提取工艺优化主要以单因素考察，正交设计为主，对多因素的关联研究较少。传统的柱层析色谱分离方法采用硅胶柱分离纯化马钱子总碱，有机溶剂消耗量大，且分离周期长，洗脱得到的总碱量较少，无法满足高效快速制备纯品的要求。离子交换树脂预处理过程复杂，洗脱率也不理想。大孔吸附分离技术是一种中药深加工技术，具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、速度快、选择性好，解吸条件温和，再生处理方便，使用周期长，易构成闭路循环，节省费用等诸多优点，已被广泛用于中草药有效成分的分离纯化。据此，本发明提供了一种简便快速地从马钱子中提取并分离纯化马钱子总碱，提高生物总碱的富集量和纯度的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种马钱子总碱的提取及纯化方法，包括如下步骤：

（1）通过 Box-Behnken 响应面法设计优化酸水回流提取马钱子总碱工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，并据此分析预测最佳的提取工艺条件；

（2）称取马钱子制品，用粉碎机粉碎，将粗粉装入圆底烧瓶，以6-12倍量加入酸水溶液，在步骤（1）得到的最佳工艺条件下加热回流1-2h，过滤提取液，浓缩成膏；

（3）将步骤（2）中所得的膏状提取物粉碎研磨，搅拌溶解于蒸馏水中，倒入装填有大孔吸附树脂的玻璃柱内，用洗脱液进行洗脱，洗脱4倍柱体积，洗脱液流速为1. 0ml/min，浓缩烘干，得到马钱子总碱的纯化物。

回流提取工艺中所用的酸水pH=1-3，优选盐酸溶液。

以马钱子碱含有量的 40%、士的宁含有量的 60%为综合效应值，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型为：

相关系数r=0.9257，整体模型达到显著水平 (P<0.05)。

由上述模型得到的最佳提取工艺条件为：酸水与制马钱子最优液料比为10：1，提取时间1.5h，酸水pH值为1。

所用大孔吸附树脂型号为LSA-10、HPD-500、AB-8、D101，优选AB-8型大孔吸附树脂。

分离纯化过程中使用的洗脱液为乙醇溶液，优选乙醇浓度为30%-50%的溶液。

本发明的有益效果是：通过Box-Behnken 响应面法关联多因素模型，能够很好的预测并优化酸水回流提取工艺，得到最佳的提取工艺条件，提高马钱子总碱的出膏量；同时采用大孔吸附树脂柱和合适浓度的洗脱液，能够最大限度地富集并分离纯化马钱子总碱。通过本发明的方法，可简便快速地从马钱子中提取并分离纯化马钱子总碱，提高马钱子总碱的富集总量和纯度。

附图说明

图1至图3是具体实施方式中采用Box-Behnken 响应面法设计优化回流提取工艺，得到液料比、提取时间、pH值等参数的回归模型，采用Design-Expert V.8.0.6 软件，根据回归方程的分析结果作出的综合效应随各因素变化的效应面图。

具体实施方式

（一）马钱子提取工艺的确定

1.马钱子药材来源的确定