[发明专利]禽畜肉中抗生素残留的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽药残留检测方法，具体涉及一种禽畜肉中抗生素残留的检测方法。

背景技术

抗生素药物在动物饲养过程中滥用现象严重，人类长期使用抗生素含量超标的动物性食物后会造成急性或慢性中毒现象，直接危害身体健康。现有抗生素，特别是四环素类抗生素价格低廉，应用最为广泛。

现有对动物体内抗生素残留检测中发现，当检测样品中含有高蛋白时，会严重影响检测结果，如专利号为201310334436.X的中国专利“一种测定富含蛋白质样品中四环素类抗生素残留的方法”中提到，采用高效液相色谱法测定不同样品基质中土霉素含量时发现，对水样中土霉素的回收率可高达90％ ；而在猪肉组织中的土霉素时，回收率却很低，不到70％。人们认为是猪肉组织中的蛋白质等成分影响了四环素的测定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种禽畜肉中抗生素残留的检测方法，该检测方法，特别是对样品的前期处理中，能够避免高蛋白肌肉组织对抗生素回收率产生影响，检测准确度高。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种禽畜肉中抗生素残留的检测方法，包括以下步骤：

（1）取禽畜肉洗净，将表面水分吹干，然后切厚度约为0.1-1.0cm的薄片，备用；

（2）在薄片上撒上固体弱碱或喷洒弱碱水溶液；

（3）将薄片置于烘箱中30-60℃烘干，烘干至含水率为30-50%时，取出薄片，用蒸馏水洗涤1-3次，然后继续烘干直至薄片含水率不高于10%；

（4）将薄片碾碎，加提取剂提取，离心后取上清液，

（5）上清液过微孔滤膜后用超高效液相色谱与质谱联用的方法测定抗生素残留；

所述抗生素为土霉素、四环素、强力霉素和金霉素。

优选的，所述提取剂为叔丁基甲基醚与乙腈的混合溶液。

优选的，所述叔丁基甲基醚与乙腈的体积比为1:2-1:10。

优选的，所述固体弱碱为粉末状的碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或一种以上混合物，所述弱碱水溶液为碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或一种以上混合物的水溶液。

优选的，每一克禽畜肉，所述固体弱碱用量或弱碱水溶液中弱碱含量为：0.5-3g。

优选的，所述微孔滤膜的孔径大小为0.3-0.6µm。进一步优选的微孔滤膜的孔径大小为0.30µm 、0.45µm、0.50µm，最优选的为0.30µm。

本发明所达到的有益效果：

本发明对样品的处理步骤简单，处理成本低，能够避免高蛋白肌肉组织对抗生素回收率产生影响，对牛、羊、猪等含蛋白质较多的肉类制品中抗生素的检测准确度高，回收率高。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

实施例1

（1）取猪肉5g洗净，将表面水分吹干，然后切厚度约为0.1cm的薄片，备用；

（2）在薄片上撒上碳酸钠粉末7g，搅拌均匀，

（3）将薄片置于烘箱中45℃烘干，烘干至含水率为30%时，取出薄片，用蒸馏水洗涤3次，然后继续烘干直至薄片含水率不高于10%；

（4）将薄片碾碎，加提取剂提取，离心后取上清液，提取剂为叔丁基甲基醚与乙腈的混合溶液24mL，具体的，叔丁基甲基醚与乙腈的体积比为1:2。

（5）上清液过微孔滤膜后用超高效液相色谱与质谱联用的方法测定抗生素残留；微孔滤膜的孔径大小为0.3µm

用超高效液相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司生产的Agilent1290型号高效液相色谱仪）中平行测定三次，测定条件参考如下：

色谱条件：Waters Acquity UPLC BEH C18柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相A 为0.03％甲酸水溶液；B 为甲醇。梯度洗脱程序：0～5.0min，1％～5％ B ；5.0～10.0min，3％～90％ B ；10.0～11.0min，90％ B～3％B ；11.0～13.0min，维持5％ B。流速0.25mL/min ；柱温30℃ ；进样体积：5.0μL。

质谱条件：电喷雾离子源(ESI+) ；毛细管电压为3.5KV ；锥孔电压为3.0V ；RF 透镜电压为0.5V ；源温为110℃ ；脱溶剂温度为350℃ ；脱溶剂气流速度为650L·h-1；锥孔反吹气流速度为50L·h^-1。