[发明专利]植物病原菌抗原复合物、抗体、检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了植物病原菌抗原复合物、抗体、检测试剂盒及其应用。具体地，本发明提供了一种植物病原菌抗原复合物，包括：(1)抗原蛋白R1，所述的抗原蛋白R1具有来源于植物病原菌的具有免疫原性的表位；(2)脂质结合蛋白R2；和(3)脂质分子R3；其中，所述的脂质结合蛋白围绕所述的脂质分子，而所述的脂质分子形成脂质层，而所述的抗原蛋白嵌入所述的脂质层，并露出所述的具有免疫原性的表位。本发明还提供了采用本发明抗原复合物制得的抗体，所述抗体可用于制备检测植物病原菌的试剂盒，用于实地检测植物病原菌。

技术领域

本发明属于生物技术领域和植物疾病检测领域。具体地，本发明涉及植物病原菌抗体制备方法、抗体、检测试剂盒及其应用，尤其在在植物疾病检测中的应用。

背景技术

在自然界中，植物疾病可依造成因素分为两类，一是寄生性疾病，是由病原菌感染引起的疾病；二是非寄生性疾病，如养分缺乏，矿物类的毒害，光线不足或过多等原因造成的植物伤害。前者的可怕之处是传染性。当无法大量施用农药时，少数被感染的植物可以在短时间里传染大批的植物，疾病蔓延很难控制。受病原菌感染的植物不仅对人类和动物有毒害，更会使粮食的质量降低和产量减少。目前，每年全世界大约有25％的农作物因病害和虫害而损失，且有数以万计的植物疾病会影响所栽培的作物。柑橘黄龙病就是一个经典的例子。

柑橘黄龙病是世界柑橘生产上的毁灭性病害，是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌引起，能够侵染包括柑橘属、枳属、金柑属和九里香等多种芸香科植物。目前，该病主要分布在亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的近50个国家和地区，中国19个柑橘生产省(市、自治区)中已有11个受到该病危害，严重制约柑橘产业的健康发展。

目前控制植物寄生性疾病的主要方法是早期鉴定疾病和相应的防治措施。以柑橘黄龙病为例，如果等一颗柑橘树的叶子已经明显变黄了再除去就太晚了，因为它很可能已经严重感染周边的一批柑橘树了。因此预防大面积感染必须用高灵敏度的手段频繁的检测黄龙病菌，鉴定早期被感染的柑橘树。目前能达到此灵敏度要求的是以PCR为主的分子生物学诊断方法。但是PCR方法的缺陷是需要专业人员操作，一般情况要把树叶样品带回实验室做实验。这个缺陷大大限制了农民进行普遍的和频繁的实地检测。

因此，本领域亟待开发高灵敏度的便于实地检测的植物疾病检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏、快速、可靠、特异性佳、便于实地使用的植物病原菌检测技术，包括植物病原菌抗原复合物、抗体、检测试剂盒及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种植物病原菌抗原复合物，所述的抗原复合物包括：

(1)抗原蛋白R1，所述的抗原蛋白R1具有来源于植物病原菌的具有免疫原性的表位；

(2)脂质结合蛋白R2；和

(3)脂质分子R3；

其中，所述的脂质结合蛋白围绕所述的脂质分子，而所述的脂质分子形成脂质层，而所述的抗原蛋白嵌入所述的脂质层，并露出所述的具有免疫原性的表位。

在另一优选例中，所述的抗原蛋白R1为重组蛋白。

在另一优选例中，所述的抗原蛋白R1为植物病原菌膜蛋白。

在另一优选例中，所述的抗原蛋白R1为植物病原菌全长膜蛋白和/或膜蛋白片段。

在另一优选例中，所述的膜蛋白片段为膜蛋白胞外区片段。

在另一优选例中，所述的抗原蛋白R1包括嵌入所述的脂质层的嵌入部(或跨膜部)、露出于所述脂质层的第一主表面的第一外露部(或对应于原抗原的胞外域)、以及露出于所述脂质层的第二主表面的第二外露部(或对应于原抗原的胞内域)。

在另一优选例中，所述的抗原蛋白R1为植物病原菌的具有免疫原性的表位与载体蛋白融合所形成的融合蛋白。