[发明专利]一种干血斑中维生素D含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，涉及一种干血斑中维生素D含量的检测方法。

背景技术

维生素D[Vitamin D(VD)]是一种脂溶性维生素，主要包括植物源的维生素D2和阳光照射合成的维生素D3，二者的生物活性具有差异，需要同时监控。25-羟基维生素D是维生素D在人体内的主要存储形式，是临床检测评价维生素D营养状况的最佳指标(Bunch D R,Miller A Y,Wang S.Development and validation of a liquid chromatography-tandem mass spectrometry assay for serum25-hydroxyvitamin D2/D3using a turbulent flow online extraction technology.[J].Clinical Chemistry&Laboratory Medicine,2009,47(12):1565-72.)。维生素D可以帮助人体利用钙磷，强健骨骼(Müller D N,Kleinewietfeld M,Kvakan H.Vitamin D review.[J].Journal of Renin-Angiotensin-Aldosterone System,2011,12(2):125-8.)。人体内维生素D水平若长期处于异常水平，会导致各种疾病。维生素D缺乏可能导致儿童佝偻病，也是继发性甲状旁腺机能亢进症的常见病因，还与糖尿病、癌症、心血管疾病、自身免疫性疾病等有关(Holick M F.Vitamin D deficiency.[J].New England Journal of Medicine,2007,357(3):266-81.)。而维生素D过量，可能引起高血钙和高尿钙(Gallagher J C,Smith L M,Yalamanchili V.Incidence of hypercalciuria and hypercalcemia during vitamin D and calcium supplementation in older women.[J].Menopause-the Journal of the North American Menopause Society,2014,21(11):1173-80.)。因此，对于机体内维生素D水平的检测非常有必要。

发现维生素D两个世纪以来，传统维生素D的检测方法主要包括酶联免疫法、放射免疫法、免疫化学发光法、竞争蛋白结合法、高效液相色谱(HPLC)法，它们主要存在以下问题：(1)免疫法和竞争蛋白结合法会受到生物样本中高亲和力结合蛋白的基质干扰，存在准确度低、特异性差的问题，同时无法区分维生素D2和维生素D3；(2)HPLC法前处理复杂、分析时间长，通量低。LC-MS/MS法具有选择性强、灵敏度高、检测时间短的特点，利用LC-MS/MS法检测血清中的25-羟基维生素D已经成为了行业金标准，将这种方法称为血清法，该方法目前是行业领域内应用最广泛的维生素D检测方法(Roth H J,Schmidt-Gayk H,Weber H,et al.Accuracy and clinical implications of seven25-hydroxyvitamin D methods compared with liquid chromatography-tandem mass spectrometry as a reference[J].Annals of Clinical Biochemistry,2008,45(Pt2):153-9.)。血清法检测维生素D的含量需要的血液样本量大为2-3mL；对于新生儿来说，一个3公斤的正常宝宝全身的含血量大概为220mL，假设抽血量为3mL，那么就意味着宝宝的失血量为1.4％，可能威胁到宝宝的正常发育成长。为了预防疾病而让宝宝处于危险中，这无疑本末倒置。除了需血量大之外，血清法运输保存都有严格的要求，采血也需要专业的医护人员，对于偏远地区的人来说检测非常不方便。因此，急需有一种新的方法来补充血清法的不足。

干血斑法用血量少，适合新生儿检测，只需要在足跟或指尖采几滴血即可。这种方法不需要专业的医护人员来采血，只要按照说明书上的示范操作即可在家完成血斑的制作，而且保存持久、运输方便，因此即使地处偏远地区，也可享受到知名大医院的精准检测，只需要将样本快递到该医院即可，方便快捷。基于这些优点，干血斑法非常适宜作为血清法的补充，投入临床检测。

因此，在本领域中，开发一种干血斑中维生素D的检测方法迫在眉睫。