[发明专利]一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种活化莱茵衣藻的方法，特别是一种活化濒死亡状态莱茵衣藻的方法。

背景技术

莱茵衣藻是一种单细胞的低等藻类，属于绿藻门团藻目衣藻科衣藻属。在自然界中，被认为属于土壤生物。莱茵衣藻的采集地包括温带，热带和极地地区，被分离的地点包括淡水湖泊和池塘、污水池、海洋和微咸水、雪、花园和农业土壤、沙漠、森林、泥炭沼泽等。莱茵衣藻具有两根等长的鞭毛，具有大型的杯状叶绿体，能够进行光合作用。莱茵衣藻培养方式简单，花费低，生长周期短，并且在实验室中就可以进行大量的培养。莱茵衣藻是单倍体，并且已经完成了全基因组测序工作。衣藻生化技术、细胞技术与分子生物学技术都已经成熟。所以目前衣藻被作为模式生物被广泛应用于各种科学研究，包括与纤毛疾病相关的纤毛组装和摆动的研究，光合作用的研究，生物柴油的研究，金属离子污染毒害的研究，并且莱茵衣藻有望可以作为蛋白质的合成机器生产药用蛋白质。

为了方便在实验室中进行研究，莱茵衣藻野生型和突变体藻株通常保存在固体平板培养基上，在藻株无污染的情况下通常一个月进行一次活化，通过划线转接到新鲜的固体平板上。但是目前由于转接活化不及时、染菌或者突变体藻株的生长特性等原因，保存在固体平板上的藻株会出现生长状态不佳，濒死亡的状态，即使划线转接到新鲜的固体平板培养基上也不能进行生长，藻株逐渐死亡，不能获得藻落，最终导致藻株的死亡丢失。实验室需要再次从国外的衣藻库购买新的藻株，价格昂贵且不方便运输。同时可能导致实验室筛选获得的珍贵的突变体藻株的丢失，科研损失巨大。

发明内容

本发明的目的是提供一种活化濒死亡的莱茵衣藻的方法，解决目前实验室中藻株状态不佳进而死亡丢失的问题。

本发明的目的是这样实现的：将平板上划有濒死亡状态衣藻的琼脂块用手术刀切下，将琼脂块转移到装有液体TAP培养基的小锥形瓶中，23±0.5℃，放置到摇床上避光摇晃过夜，摇床的转速为90rpm，次日放到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养环境中振荡培养24h，摇床的转速为180rpm；然后取不含琼脂块的上清培养基涂布到含有50μg/ml抗菌剂的TAP固体培养基上，放置到23±0.5℃，8000Lx光强下，14h光照/10h避光的光周期培养5-15天，即可获得活化好的藻株克隆。

所述实验藻种为：莱茵衣藻，即Chlamydomonas reinhardtii。

所述TAP液体培养基为：Tris 2.42g/L，TAP盐溶液25ml/L，磷酸盐溶液0.375ml/L，微量金属元素溶液1ml/L，冰醋酸1ml/L，121℃高压蒸汽灭菌30min。所述TAP固体培养基为在液体培养基配置时加入15g/L的琼脂粉后，121℃高压蒸汽灭菌30min，倒平板。

所述的TAP盐溶液为：NH₄Cl 15g/L，CaCl₂·2H₂O 2g/L，MgSO₄·7H₂O 4g/L；所述的磷酸盐溶液为：KH₂PO₄ 144g/L，K₂HPO₄ 288g/L；Hutner Trace Metal微量元素溶液为：EDTA二钠盐50g/L，H₃BO₃ 11.4g/L，ZnSO₄·7H₂O 22g/L，CoCl·6H₂O 1.61g/L，MnCl₂·4H₂O 5.06g/L，CuSO₄·5H₂O 1.57g/L，(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 1.1g/L，FeSO₄·7H₂O 4.99g/L，用KOH或者HCl调节pH至7.0。

所述的含有多菌灵的TAP固体培养基平板中加入的抗菌剂为多菌灵，多菌灵使用的终浓度为50μg/ml。

所述的多菌灵的加入方法为：将适量多菌灵加入到TAP培养基的冰醋酸成分中溶解后，再进行培养基的配置。