[发明专利]J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用

说明书

本发明属于动物疾病检测技术领域，公开了J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用。本发明所述J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。实验表明，该抗原表位对J亚群血清有反应同时对AB亚群血清无反应，能够特异性识别J亚群禽白血病病毒。本发明所述融合蛋白能够制成疫苗，刺激受体产生抗体，保护受体抵抗J亚群禽白血病病毒感染。本发明所述融合蛋白免疫动物可制备J亚群禽白血病病毒特异性抗体。本发明所述J亚群禽白血病病毒特异性抗体可以与J亚群禽白血病特异性抗原表位特异性识别，开发检测试剂盒，用于区分AB亚群和J亚群禽白血病。

技术领域

本发明属于动物疾病检测技术领域，具体涉及J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用，尤其是J亚群禽白血病病毒GP85型特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及J亚群禽白血病检测试剂盒。

背景技术

禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)和禽肉瘤病病毒(ASV)引起的禽类肿瘤性疾病，对我国养鸡业危害重大。ALV/ASV可分为A-J 10个亚群，其中A、B和J亚群为发生于田间鸡的外源性病毒。目前该病尚无有效治疗手段，主要通过排除阳性鸡净化种群来控制该病传播。J亚型ALV可水平传播和垂直传播，垂直传递可导致子代免疫耐受，抗体检测表现为阴性。同时发病鸡出现急性肿瘤引起死亡，一旦发现患病需立即处理。AB亚型ALV主要通过垂直传播影响鸡雏质量，病鸡体重增长缓慢，产蛋量减少。对于J亚型和AB亚型ALV的诊断有助于根据不同亚群病毒引起的机理和症状进行禽白血病的防控，而鸡场也可根据成本和需求对病鸡进行分批次处理，减少经济损失。

抗原表位是指位于抗原分子表面具有特殊结构和免疫活性的化学基团，可刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能被其识别的部位，又称抗原决定簇，禽白血病病毒RNA编码区翻译gag-pol-env。gag基因编码病毒内部结构的核衣壳蛋白主要有P27、P19、P15、P12四种蛋白，P27蛋白在禽白血病毒中高度保守，已根据P27蛋白开发出多种禽白血病检测试剂盒。但只能用于检测ALV病毒不能区别各病毒亚群。

Env是囊膜糖基化表面蛋白，水解后形成膜表面蛋白SU(surface glycoprotein)(gp85基因编码)和跨膜蛋白TM(transmembrane protein)(gp37基因编码)，gp85决定病毒亚群特异性和宿主范围，是抗原表位的主要潜在区域。目前对禽白血病特异性亚群特异性抗原表位的研究工作都是基于gp85蛋白进行。

目前对亚群特异性抗原表位研究的方法局限于对所研究的特定亚群gp85蛋白进行分析，如定位J亚群抗原表位只针对J亚群gp85蛋白进行分析，检测方法中待测样品为J亚群特异性血清或ALV-J蛋白制备的鼠单抗，这种方法能找到的J亚群抗原表位但是特异性不强，不能排除找到的抗原表位区域包含有其他禽白血病亚群的抗原识别位点。在用重组蛋白对不同亚型禽白血病病毒感染血清进行区分时，由于各亚群gp85蛋白存在一定的同源性，所以无法对禽白血病抗体亚型进行体外诊断。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供J亚群特异性抗原表位，继而开发检测试剂盒用于区分AB亚群和J亚群禽白血病。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

申请人通过比对不同亚群gp85蛋白序列，找到AB亚群和J亚群gp85蛋白的差异性区域，从差异性区域筛选来源于AB亚群和J亚群的15个多肽进行合成，精确找到可区分禽白血病AB亚群和J亚群的多肽，同时免疫实验分析15个多肽时采用AB亚群特异性血清和J亚群特异性血清为样本，如某J亚群来源多肽对J亚群血清有反应同时对AB亚群血清无反应即为J亚群特异性抗原表位。相比于以前的研究来说，可找到能区分AB亚群和J亚群的特异性抗原表位。