[发明专利]一种贵港报春苣苔的组织培养方法

权利要求书

1.一种贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)外植体的消毒灭菌：于春季取贵港报春苣苔带叶柄的幼嫩叶片，先用洗衣粉浸泡10-15min后在流水下冲洗干净10-15min，并用软毛刷轻轻刷洗叶片；在超净工作台上先用棉球蘸取70％酒精拭擦叶片表面，无菌蒸馏水冲洗3-5次，将叶片在75％酒精中浸泡10-12s，无菌蒸馏水冲洗3-5次，再用0.1％升汞溶液处理8-10min，无菌蒸馏水冲洗3-5次；灭菌过程中轻轻震荡使酒精或升汞充分接触叶片；所述的0.1％升汞溶液中加入有吐温-20，每100mL0.1％升汞溶液中加入2滴吐温-20；

(2)初代诱导：将消毒灭菌好的叶片切下叶柄，余下的叶片按照以下方法切割：横切、纵切，切下的叶片要求四周切去少许组织，保证四周均有切口；然后将叶柄接入初代培养基中培养25-30d，得到愈伤组织；将横切叶片和纵切叶片接入初代培养基中培养24-30d，诱导出不定芽和愈伤组织；要求叶柄、叶片的正面朝上，叶背朝下，使叶背接触培养基；

(3)增殖培养：将从叶片直接获得的具有1对以上叶片的不定芽接入增殖培养基中培养28-35d；

(4)愈伤组织分化：将从叶片或叶柄诱导出来的愈伤组织切成1cm×1cm大小，然后接入分化培养基中培养30-32d；

(5)壮苗培养：当组培苗具有2对以上叶片时，转接于壮苗培养基中培养15-18d；

(6)生根培养：选取生长健壮，具有2对以上叶片的植株，转接于生根培养基中培养25-28d；

步骤(2)中用于叶柄的愈伤组织诱导培养基为：MS+6-BA3-5mg/L+2,4-D0.5-1.0mg/L。

2.根据权利要求1所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述的横切是在叶片中部位置垂直中脉切下，将叶片一分为二；所述的纵切是沿着叶片中脉将叶片切为两部分。

3.根据权利要求1所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中用于叶片的不定芽诱导培养基为MS+6-BA3.0-5.0mg/L+IAA1.0-2.0mg/L，用于叶片的愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA3-5mg/L+2,4-D0.5-1.0mg/L。

4.根据权利要求1所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述的增殖培养基为MS+ZT0.5-1.0mg/L+NAA0.05-0.10mg/L+土豆30g/L+香蕉30g/L+苹果20g/L+椰汁100ml/L。

5.根据权利要求1所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述的分化培养基为MS+KT0.5-1.5mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+土豆30g/L+香蕉30g/L+苹果20g/L+椰汁100ml/L。

6.根据权利要求1所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，步骤(5)中所述的壮苗培养基为1/2MS+土豆10-30g/L+香蕉15-45g/L+椰汁100-200ml/L。

7.根据权利要求6所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，所述1/2MS培养基为：将MS培养基中的大量元素减至一半，蔗糖为15g/L，其余成分及用量与MS保持一致。

8.根据权利要求1所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，步骤(6)中所述的生根培养基为3/4MS+NAA 0.01-0.05mg/L+活性炭1.0-3.0g/L。

9.根据权利要求8所述的贵港报春苣苔的组织培养方法，其特征在于，所述的3/4MS培养基为：将MS培养基中的大量元素减为3/4，蔗糖为22.5g/L，其余成分及用量与MS保持一致。