[发明专利]一种高产饲用复合酶的米曲霉菌株及其应用

权利要求书

1.一种高产饲用复合酶的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株，所述菌株为米曲霉DJ36菌株，已于2017年2月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCCNO.13575。

2.一种如权利要求1所述的米曲霉菌株的应用，其特征在于，所述米曲霉菌株用于制备富多肽饲料添加剂。

3.一种如权利要求1所述的米曲霉菌株应用于制备富多肽饲料添加剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、制备米曲霉菌的单孢子菌悬液：

将米曲霉菌菌种活化后，用含有0.01％v/v吐温80的0.75％无菌生理盐水将孢子洗下，放到装有50mL无菌生理盐水和无菌玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡20-30min，待孢子充分打散后，调节孢子悬液中孢子的含量为1.0×10⁸CFU/mL，即得单孢子菌悬液；

步骤2、液体菌种制备：

按照5％-10％v/v的接种量，将步骤1中所得的单孢子菌悬液接种在装有30-50mL已灭菌的种子培养基的250mL三角烧瓶中，培养基中加入20粒已灭菌的玻璃珠，瓶口以6-8层纱布封口，置于空气摇床中扩大培养，设定转速为180-220r/min，温度为26-34℃，培养2-4d，得到二级种子培养液；

步骤3、液态发酵制备复合酶：

在发酵容器中装入发酵培养基，121℃灭菌20-30min，将温度逐渐降至28-32℃，取步骤2所得的二级种子培养液接种于发酵容器中，初始发酵控制条件为：温度28-32℃，发酵培养基初始pH5.5-6.5；发酵2-4d，发酵温度降为25-28℃；发酵至3d开始补料每隔12h补料一次，共补料2-3次；发酵6d时，将发酵温度提高至35-40℃，用2mol/L的NaOH调节发酵液pH值；发酵6d时，添加灭过菌的豆粕粉和谷朊粉悬浮液；继续发酵至7d，接着将温度提高到45-50℃，并将发酵液pH调节至7.0-7.5，维持4h，结束发酵；

步骤4、发酵液酶解杂蛋白：

发酵结束后，发酵液导入酶解罐中，向发酵液中添加麸皮、谷糠、豆粕粉、谷朊粉，使发酵液变成浓稠状，调节其pH值为5.5，控制温度为50℃，维持4-6h，中间搅拌2-3次；调节pH到4.0-7.0，控制温度为50℃，维持4-6h，得到发酵酶解料；

步骤5、干燥、粉碎、包装：

酶解结束后，采取55-65℃低温烘干的方法对以上发酵酶解料进行干燥处理，粉碎后过150-200目筛，成品包装得到富多肽饲料添加剂。

4.根据权利要求3所述的米曲霉菌株应用于制备富多肽饲料添加剂的方法，其特征在于，步骤2中所述种子培养基的制备方法为：分别取蛋白胨5-10g，黄豆粕粉5-10g，谷朊粉10-20g，麸皮粉5-10g，葡萄糖10-15g，淀粉10-20g，(NH₄)₂SO₄ 1g，吐温-80 0.5mL，无机盐营养液10mL，充分混合后，调节pH5.0-6.5，补充去离子水至1000mL，再置于121℃下灭菌15min。