[发明专利]一株具有阻断活性的抗尼帕病毒G蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明属于生物免疫分析技术领域，具体涉及一株具有阻断活性的抗尼帕病毒G蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明经过密码子优化方法克隆得到尼帕病毒G蛋白基因，该蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第898‑1806位碱基位所述的序列，其蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。本发明提供了一种分泌抗尼帕病毒G蛋白且具有一定阻断活性的单克隆抗体的杂交瘤细胞株15‑D11(中国典型培养物保藏中心保藏编号为CCTCC NO.C2016207)。用原核表达并纯化的尼帕病毒G蛋白免疫BALB/c小鼠，筛选出一株能稳定分泌抗尼帕病毒G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。本发明制备的单抗可用于动物免疫分析技术领域。

技术领域

本发明属于生物免疫分析技术领域，具体涉及一株具有阻断活性的抗尼帕病毒G蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

尼帕病毒(Nipah virus)是一种新发现的人兽共患病毒，属副粘病毒科RNA病毒。可引起人和猪以中枢神经系统、呼吸系统为主要病变的急性、高度致死性的传染性疾病。

1997年马来西亚Kinta地区爆发过发热性脑炎，造成1人死亡。1998年，马来西亚北部再度引起猪和人类致命性的脑炎，经由接触病猪组织及体液感染。而且两次的病患者均为养殖场工人、屠宰场工人以及从事生猪加工的人员。1999年3月新加坡某屠宰场发生发热性脑炎11例，造成1人死亡，其所屠宰的生猪80％以上来自马来西亚。此后，在印度和孟加拉国也有爆发此病，给这些国家的畜牧业发展和人民健康造成了严重的危害。

尼帕病毒在周边国家的流行态势对我国造成了潜在的威胁。我国东南沿海地区和云南地区具有适合尼帕病毒流行的生态坏境和宿主动物，且国内已从南方地区的蝙蝠体内检测到尼帕病毒的抗体，加上频繁的贸易往来使得该病传入我国的可能性不断增加，一旦爆发该病势必对我国的养殖业和人民的正常生活造成危害。

目前，该病诊断主要通过临床诊断结合病毒分离、免疫组化、PCR等技术。这些方法在病原检测或抗体检测中各有特点，在该病的诊断中发挥了重要的作用。但如何在此基础上研制开发纯度高、性能稳定且高效快速的检测试剂，更易在生产实践中推广应用的检测方法是尼帕病毒疾病诊断与防治工作的一个重点。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种尼帕病毒G基因编码的重组蛋白。

本发明的第二个目的是利用上述重组蛋白制备抗尼帕病毒G蛋白且具有一定阻断活性的单克隆抗体。

本发明的第三个目的是利用SEQ ID NO：2所示尼帕病毒G蛋白的重组蛋白作为抗原蛋白的应用。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种尼帕病毒G蛋白基因，该基因片段包含尼帕病毒的主要抗原表位，经密码子优化后核苷酸序列如SEQ ID NO：1中第898-1806位碱基所示(即CDS区)，该基因编码303个氨基酸残基，其蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还包括利用SEQ ID NO：2所示一种尼帕病毒G蛋白的重组蛋白作为抗原蛋白的应用。

申请人进一步制备了一种单克隆抗体，它是由序列表SEQ ID NO：2所述的尼帕病毒G蛋白的重组蛋白免疫动物后经融合实验得到的杂交瘤细胞株15-D11所分泌的，申请人将该株杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株15-D11，于2016年12月6日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO:C2016207。

上述杂交瘤细胞株15-D11能够分泌具有阻断活性的单克隆抗体，该单抗能特异性结合尼帕病毒G蛋白。

本发明的优点在于：本发明提供了抗尼帕病毒G蛋白的单克隆抗体和分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该单克隆抗体特异性强，生物结合活性高，与转染表达尼帕病毒G蛋白的A549细胞发生反应，而与对照组的A549细胞不发生反应。