[发明专利]一种快速检测褐飞虱对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗药性的方法有效
申请号: | 201710186159.0 | 申请日: | 2017-03-21 |
公开(公告)号: | CN107641655B | 公开(公告)日: | 2021-06-18 |
发明(设计)人: | 刘泽文;张懿熙;刘美玲 | 申请(专利权)人: | 南京农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/6844 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 孙斌 |
地址: | 21009*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 检测 褐飞虱 有机磷 氨基甲酸酯 杀虫剂 抗药性 方法 | ||
1.一种基于环介导恒温扩增技术(LAMP)的褐飞虱对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗药性快速分子检测方法,其特征在于如下步骤实现:
(1)提取单头褐飞虱2-3龄若虫基因组DNA;
(2)LAMP反应体系 2.5 μL 10×Isothermal Amplification Buffer,8U Bst2 .0DNApolymerase,1 μL单头褐飞虱基因组DNA,终浓度0.25 mmol/L的dNTPs、1 mmol/L的MgSO4、0.2 μmol/L的外引物、0.8 μmol/L内引物、0.4 mol/L的betaine,200 mmol/L羟基萘酚蓝HNB加双蒸水至反应总体积为25 μL ;其中所述的外引物F3:CACCCTGTTCGGTGACTTC;B3:GGTCGTAGACGTCGAGTGT;内引物FIP:GGCACCACCACGTTCATGTAGA-CGGCTCGACTATGTGGAATC;BIP:CGTCCTCGACCAAAGCAGGC-CGTGCCCGAGTAGAAACTTC;
(3)LAMP反应程序 64℃60-70min;
(4)结果判定 反应结束后,反应液为天蓝色,说明样品为抗性个体,反应液仍为紫色,说明样品为敏感个体;
所述内引物、外引物根据SEQ ID NO.1设计得到。
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