[发明专利]用于快速检测多种真菌并鉴定菌种的引物和探针及其应用

权利要求书

1.用于快速检测多种真菌并鉴定菌种的引物和分子信标，其特征在于，它包括如下序列：

(1) 扩增18sV2区的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1~2 所示；

(2) 扩增18sV9区的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3 ~4 所示；

(3) 检测18sV2区扩增子的分子信标，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5 所示；

(4) 检测18sV9区扩增子的分子信标，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6 所示；

(5) 检测18sV9区扩增子的分子信标，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7 所示；

上述2对引物对和3条分子信标在一次检测中共同使用；

所述的真菌包括：白色念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌、新型隐球菌、曲霉菌属、毛霉菌属、青霉菌属。

2.权利要求1所述的用于快速检测多种真菌并鉴定菌种的引物和分子信标在制备真菌检测试剂盒中的应用。

3.用于快速检测多种真菌并鉴定菌种的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如下试剂：

(1) 扩增反应试剂：pH=8.00 1M Tris-HCl缓冲液、2M KCl、1.2M MgCl₂、dNTPs、NTPs、权利要求1所述的引物和分子信标；

(2) 5×Q-solution：该反应液中含有2.7M甜菜碱、55μg/ml BSA、31.5mM DTT和6.7%DMSO；

(3) 酶反应液：该反应液中含有5.5μg/ml BSA、逆转录酶和T7 RNA 聚合酶；

(4)阳性对照：含有8种念珠菌、1种隐球菌、1种曲霉菌、1种毛霉菌、1种青霉菌RNA的水溶液；

所述的念珠菌为：白色念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌，所述的隐球菌为：新型隐球菌，所述的曲霉菌为烟曲霉，所述的毛霉菌为：总状毛霉，所述的青霉菌为：绳状青霉；

(5) 阴性对照：去RNA酶的水。

4.根据权利要求3所述的用于快速检测多种真菌并鉴定菌种的试剂盒，其特征在于，阳性对照中，每一种真菌RNA浓度为30ng/μL。