[发明专利]文蛤酚氧化酶基因及其编码蛋白和应用

说明书

本发明涉及分子生物学和生物工程技术领域，具体的说是一种文蛤酚氧化酶基因及其编码蛋白和应用。本发明从文蛤中克隆了酚氧化酶cDNA全长序列并原核重组表达了该蛋白，该文蛤酚氧化酶基因cDNA全长具有序列SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列，获得的重组酚氧化酶具有酶活性，具有大规模生产的可能，可以弥补天然蛋白量低以致难以满足需要的局限。鉴于酚氧化酶在贝类免疫及工业、食品等领域中的重要作用，本发明所介绍的文蛤酚氧化酶基因及其编码蛋白具有在相关领域的应用前景，同时可以作为备选的水产养殖贝类新型免疫增强剂。

技术领域

本发明涉及分子生物学和生物工程技术领域，具体的说是一种文蛤酚氧化酶基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

酚氧化酶是一种含铜氧化酶，在有氧条件下，能把酚类氧化为醌类。酚氧化酶具有广泛的功能，在自然界中参与黑色素生成、表皮硬化、伤口愈合以及免疫防御等生理功能。酚氧化酶被认为是无脊椎动物免疫防御系统中最重要的免疫因子之一，能通过黑化作用参与病原的体内清除。其在贝类中的免疫重要性已被广泛报道，研究证实酚氧化酶参与鲍鱼、扇贝、牡蛎、蛤等多种贝类的免疫应答。另外，由于酚氧化酶的氧化产物为水，不产生过氧离子，被认为是一种绿色环保的氧化酶，已被应用在食品、工业、包装指示剂、污水处理等众多领域。

酚氧化酶的重要作用使其具有广泛的应用价值。文蛤是一种在沿海和滩涂地区广泛分布的双壳贝类，在我国沿海，文蛤作为一种重要的经济贝类而被广泛养殖。目前，还没有从文蛤中获得酚氧化酶基因的报道。

发明内容

本发明的目的是一种文蛤酚氧化酶基因及其编码蛋白和应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种文蛤酚氧化酶基因，文蛤酚氧化酶基因具有SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列。其是通过cDNA文库结合RACE技术从文蛤中克隆得到的酚氧化酶的cDNA序列，该序列全长2238bp，其中编码框2019bp，具体为SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列。

一种文蛤酚氧化酶基因的编码蛋白，所述文蛤酚氧化酶基因的编码蛋白为具有SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列，文蛤酚氧化酶基因所编码的蛋白共包含672个氨基酸

一种文蛤酚氧化酶基因构建方法，通过PCR扩增文蛤酚氧化酶基因，而后通过酶切位点连接到表达载体上，在IPTG诱导条件下，于宿主菌株中体外重组表达该蛋白，重组产物经纯化，即体外重组表达获得含有SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列的文蛤酚氧化酶重组蛋白。

所述表达载体为pGEX-4T-1；宿主菌株为大肠杆菌BL21；纯化采用纯化柱GSTrapFF。

一种文蛤酚氧化酶基因的应用，经铜离子处理后所述含有SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列的文蛤酚氧化酶重组蛋白在制备贝类的免疫增强剂中的应用。

本发明所具有的优点：

本发明从文蛤中克隆酚氧化酶cDNA全长序列并原核重组表达该蛋白，重组蛋白具有酚氧化酶活性，能够抑制文蛤治病副溶血弧菌的生长繁殖，可以作为备选的贝类免疫增强剂，同时也具有在工业、食品等其他相关领域的应用前景。本发明重组蛋白具有大规模生产的可能，可以弥补天然蛋白量低以致难以满足需要的局限。

附图说明

图1为本发明实施例2提到的纯化的文蛤酚氧化酶重组蛋白；其中，M：蛋白marker；1：IPTG诱导前总蛋白；2：IPTG诱导后总蛋白；3：亲和柱纯化后的文蛤酚氧化酶-GST重组融合蛋白。

具体实施方式

下面的实施例中将本发明作进一步阐述，但本发明不限于此。